DHPLC原理VIP专享

DHPLC 变性高效液相色谱(DHPLC)技术是一种能用于快速，自动和高通量检测基因的技术平台。在分子生物学研究和临床基因诊断领域中，DHPLC 技术可应用于DNA的绝大部分检测，在很多领域已建立了快速、自动化核酸分析新方法和新标准。利用该技术可以对单链和双链核酸进行快速、准确、自动化的分离、分析和定量；可用于单碱基替换（或单核苷酸多态性），小片段缺失或插入等多种已知和未知基因突变的检测；DNA/RNA 片段大小判定；寡核苷酸分析及纯化；基因表达定量（Q-RT-PCR）和基因型分析（Genoty ping）；基因表达差异分析；微卫星（MSI、STR）和杂和性丢失（LOH）分析；基因或染色体的部分缺失和多倍体的半定量分析等等；该技术可在生殖细胞系和体细胞系中筛查基因变异，它的应用范围包括：癌症基础研究、癌症放疗基因监控、癌症治疗药物基因组学监控、遗传性肿瘤早期诊断、肿瘤表观遗传学研究及诊断、各类遗传疾病的基因诊断、流行病学基因研究、临床微生物基因检测、法医鉴定、动植物遗传育种研究等。 原理 DHPLC 技术是利用液相色谱技术（HPLC），既在高压闭合液相流路中，将 DNA样品自动注入并在缓冲液携带下流过专利的DNA 分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，在不同分离柱温度条件下实现对 DNA 不同的分析；由紫外检测或荧光检测被分离的DNA 样品，自动DNA 片段收集器可根据需要自动收集被分离后的DNA 样品，整个分析过程都是在计算机通过专用软件包 NAVIGATOR 完成的， 专利的DNA 分离柱具有很好的温度稳定性和酸碱稳定性，具有很长的有效寿命（大于6000 次进样）和极好的分析稳定性（99%）。 DHPLC DNA 色谱分离柱工作原理 DNA 分离柱，是使用无孔多苯乙烯-二乙烯基苯（PS-DVB）共聚物微球体作为稳定基质。因为这些微球体都与含有 18 个碳原子的烷基长碳链相连，所以色谱柱的基质是疏水，电中性的，不会与核酸分子直接发生反应。三乙基铵醋酸盐（TEAA）是一种离子对试剂，离子对试剂既是疏水性的又带正电荷，既能与核酸主链上的磷酸基团的负电荷反应，同时 TEAA 的疏水基团又与固定相上碳-18链的疏水基团发生反应。这种离子对试剂是连接核酸和柱基质之间的桥梁，因此，它作为“桥分子”使DNA 片段吸附在固定相上面。通过改变流动相中乙腈的浓度实现DNA 片段的分离。 图1. 分离柱表面的化学反应：TEAA 分子与基质的微球体通过疏水键相连，而它的正电荷基团与带负电DNA 分子相互作用。 DHPLC 工作的三种操作...