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急性毒性试验

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1 实验一 急性毒性试验 (Acute Cytotoxicity Test) 一、 实验目的: 了解生物材料急性毒性的含义,掌握急性毒性试验的基本方法。 二、 实验原理: 医学上通常指的急性毒性试验是对药物而言的,并以半数致死量(median lethal dose, LD50)来衡量药物急性毒性的大小。所谓 LD50 是指某一药物使试验动物总体死亡一半的剂量,由于 LD50 是剂量反应曲线上最敏感的一点,而且有易测、准确和重复性好的优点,以此作为药物使用的安全指标。但对于生物材料而言,它与药物在体内的反应机理不同,大多数生物材料不能计算 LD50,所以在试验过程中,通过对实验动物进行动物静脉或腹腔注射试验材料或其浸提液来观察实验动物体重在 24、48 和 72h 的变化、运动、呼吸状态以及死亡情况作为评价的指标,判定某种生物材料的急性毒性作用。 三、实验对象:小鼠 四、实验器材和药品: 聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA),蒸馏水,生理盐水(0.9%),注射器(1ml),量筒(10ml),小烧杯(50、100ml),高压消毒器。 五、实验步骤: 1.浸提液制备: 按评价标准裁剪试样,选择适当浸提温度制备浸提液。 2.将 10 只体重在 17~23g 间的健康、未做过其他实验的小鼠随机分为实验组和对照组,每组 5 只。 3.将浸提液按每公斤小鼠体重注射 50ml 于实验组小鼠尾静脉(50ml/kg),用生理盐水按同样方法作空白对照。 4.记录试样表面积和使用浸提液的容量;记录注射后 24h、48h、72h 两组小鼠的体重,观察其各种生物学反应情况。 六、评价方法: 1. 注射后动物反应观察指标: 程 度 症 状 无毒 轻度毒性 明显毒性 重度毒性 死亡 未见毒性症状 轻度症状,但无运动减少、呼吸困难或腹部刺激症状 有腹部刺激症状、呼吸困难、运动减少、眼睑下垂、腹泻、体重下降 衰竭、震颤、严重腹部刺激症状、眼睑下垂、呼吸困难、体重下降 注射后死亡 2 2.结果判断标准: 2.1 在 72h 观察期内,注射材料浸提液的动物反应不大于对照组动物,则认为该材料符合急性毒性试验要求。 2.2 在 72h 观察期内,注射材料浸提液动物中有 2 只以上出现轻度毒性症状或仅 1 只动物出现明显毒性症状死亡,或实验组 5 只动物的体重均下降,即使无其他中毒症状都要进行重复试验。 2.3 重复试验的动物数量应加倍,即每组需 10 只小鼠。浸提液应该重新制备。重复试验若符合 2.1 项要求,则认为该材料合格。 2.4 如实验组...

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