植物抗旱生理指标测定原理及方法

植物抗旱生理指标测定原理及方法 生命科学学院 杨歌 指标测定： 一、 可溶性糖（蒽酮法） 二、 脯氨酸 三、 丙二醛 四、 叶绿素 五、 蛋白（考马斯亮蓝法） 六、 超氧化物歧化酶（SOD） 七、 过氧化物酶（POD） 八、 谷胱甘肽（GSH） 九、 电导率 一、 可溶性糖含量的测定 1.蒽酮法 1.1 原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的 糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在可见光吸收峰位620nm。 测定对象：几乎可以测定所有的碳水化合物，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量）。 1.2 步骤 试剂：(1)浓硫酸； (2)蒽酮乙酸乙酯试剂：蒽酮------------1g 加乙酸乙酯至----50ml 实验步骤： （ 1） 称取样品0.1g， 置于研钵中，加 4ml ddH2O 研磨成匀浆，8ml ddH2O 洗涤研钵。 （ 2） 100° C 沸水浴10min，冰上冷却。 （ 3） 4000rpm 离心10min。 （ 4） 取上清5ml 转移至100ml 容量瓶定容。 （ 5） 1ml 提取液+ 1ml ddH2O+0.5ml 蒽酮+5ml 浓硫酸，轻轻混合均匀，100° C 沸水浴10min，冰上冷却。 （ 6） 620nm 处测吸光值。 1.3 计算方法 可溶性糖含量% = C*V/(W*10^6)*100% V 为植物样品稀释后的体积（ml） ------100ml C 为提取液的含糖量（μ g/ml） --------根据标准曲线计算 W 为植物组织鲜重量（g） -------------0.1g 问题及质疑： 1.目标糖含量： 标准曲线是用葡萄糖位标准制作的，而蒽酮法是测总糖的量，包括己糖、戊糖，浓硫酸将淀粉、纤维素水解成的单糖，将总糖得出的OD 值代入由单一糖做出的标准曲线，有一定误差存在。注：查看所有文献的标准曲线都是用葡萄糖制作。 2.误差分析： （ 1） 不同糖类与蒽酮试剂反应的显色程度不同。果糖最深，葡萄糖次之， 半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖最浅造成误差。 （ 2）蒽酮试剂溶解度较低，非常容易析出，在反应时加入糖的水溶液中，出现浑浊现象，影响反应进行。（ 3）介于以上原因，将上清5ml 转移至100ml容量瓶定容，稀释程度过大，当糖含量少的时候，大的误差可能会掩盖真实的糖含量。造成品数据没有实际意义。 方案修改意见： 1. 首先，做五到六组空白，测试分光光度计误差程度。 2. 增加平...