植物抗旱生理指标测定原理及方法 生命科学学院 杨歌 指标测定： 一、 可溶性糖（蒽酮法） 二、 脯氨酸 三、 丙二醛 四、 叶绿素 五、 蛋白（考马斯亮蓝法） 六、 超氧化物歧化酶（SOD） 七、 过氧化物酶（POD） 八、 谷胱甘肽（GSH） 九、 电导率 一、 可溶性糖含量的测定 1.蒽酮法 1.1 原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的 糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在可见光吸收峰位620nm。 测定对象：几乎可以测定所有的碳水化合物，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量）。 1.2 步骤 试剂：(1)浓硫酸； (2)蒽酮乙酸乙酯试剂：蒽酮------------1g 加乙酸乙酯至----50ml 实验步骤： （ 1） 称取样品0.1g， 置于研钵中，加 4ml ddH2O 研磨成匀浆，8ml ddH2O 洗涤研钵。 （ 2） 100° C 沸水浴10min，冰上冷却。 （ 3） 4000rpm 离心10min。 （ 4） 取上清5ml 转移至100ml 容量瓶定容。 （ 5） 1ml 提取液+ 1ml ddH2O+0.5ml 蒽酮+5ml 浓硫酸，轻轻混合均匀，100° C 沸水浴10min，冰上冷却。 （ 6） 620nm 处测吸光值。 1.3 计算方法 可溶性糖含量% = C*V/(W*10^6)*100% V 为植物样品稀释后的体积（ml） ------100ml C 为提取液的含糖量（μ g/ml） --------根据标准曲线计算 W 为植物组织鲜重量（g） -------------0.1g 问题及质疑： 1.目标糖含量： 标准曲线是用葡萄糖位标准制作的，而蒽酮法是测总糖的量，包括己糖、戊糖，浓硫酸将淀粉、纤维素水解成的单糖，将总糖得出的OD 值代入由单一糖做出的标准曲线，有一定误差存在。注：查看所有文献的标准曲线都是用葡萄糖制作。 2.误差分析： （ 1） 不同糖类与蒽酮试剂反应的显色程度不同。果糖最深，葡萄糖次之， 半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖最浅造成误差。 （ 2）蒽酮试剂溶解度较低，非常容易析出，在反应时加入糖的水溶液中，出现浑浊现象，影响反应进行。（ 3）介于以上原因，将上清5ml 转移至100ml容量瓶定容，稀释程度过大，当糖含量少的时候，大的误差可能会掩盖真实的糖含量。造成品数据没有实际意义。 方案修改意见： 1. 首先，做五到六组空白，测试分光光度计误差程度。 2. 增加平...
