病毒感染力的滴定(TCID50的测定)VIP专享

病 毒 感 染 力的滴定（TCID50 的测定） 概念：半数感染量（median infective dose， ID50） 表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。 一、实验目的 了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。 二、测定病毒感染力的方法 半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测 半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测 半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测 蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测 三、材料 1、长满单层的细胞 1 瓶 2、胰酶、吸球、吸管、生长液 3、96 孔细胞培养板 4、加样器、枪头 5、病毒液（PRV） 四、T CID50的操作步骤 1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续 10 倍的稀释，从 10-1-10-10。 2、将稀释好的病毒接种到 96 孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共 8 孔，每孔接种100µl。 3、在每孔加入细胞悬液 100µl，使细胞量达到 2~3×105个/ml。 4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。（100µl 生长液+100µl 细胞悬液） 5、逐日观察并记录结果，一般需要观察 5-7 天。 6、结果的计算，按 Reed-Muench 两氏法或 Karber 法 五、TCID50的计算方法 1、Reed-Mu ench 两氏法 病毒液稀释度 出现 CPE 孔数 无 CPE 孔数 累计 出现 CPE 孔所占的% CPE 孔数 无 CPE 孔数 10-1 8 0 27 0 100（27/27） 10-2 8 0 19 0 100（19/19） 10-3 7 1 11 1 91.6 （11/12） 10-4 3 5 4 6 40（4/10） 10-5 1 7 1 13 0.7（1/14） 10-6 0 8 0 21 0（0/21） CPE：Cytopathic effect 距离比例＝（高于 50%病变率的百分数-50%）/（高于 50%病变率的百分数-低于 50%病变率的百分数） ＝（91.6-50）/（91.6-40） ＝ 0.8 lgTCID50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于 50%病变率的稀释度的对数 =0.8×(-1)+(-3) =-3.8 TCID50=10-3.8/0.1ml 含义：将该病毒稀释 103.8接种 100µl 可使 50%的细胞发生病变。 2、Karber 法 病毒液稀释度 出现 CPE 的孔数 出现 CPE 孔的比率 10-1 8 8/8=1 10-2 8 8/8=1 10-3 7 7/8=0.875 10-4 3 3/8=0.375 10-5 1 1/8=0.125 10-6 0 0/8=0 lgTC...