膜蛋白[membraneprotein]的分离VIP专享

蛋白[membrane protein]的分离 一、简介： 1 细胞质膜资料 1895 年,Ov erton 从研究细胞透性得出"细胞膜由连续的脂类物质组成"。 1925 年 Gorter&Grendel:用脂单分子膜技术测定细胞膜中脂分子的总面积，提出："细胞膜是由双层脂分子组成"。 1935 年 Danielli&Dav son：从测定膜的表面张力得出细胞膜的"三明治结构模型"，即蛋白质－脂-蛋白质。 1959 年 Robertson:用电镜观察生物膜提出"单位膜模型"，将膜的分子结构与超微机构统一起来 厚度： 2(暗)+3.5(亮)+2（暗）=7.5 细胞质膜的主要功能概括如下： (1) 为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境; (2) 选择性的物质运输，包括代谢底物的输入与代谢产物的排除，其中伴随着能量的传递； (3) 提供细胞识别位点，并完成细胞内外信息跨膜传递； (4) 为多种酶提供结合位点，使酶促反应高效而有序地进行； (5) 介导细胞与细胞、细胞与基质之间的连接; 质膜参与形成具有不同功能的细胞表面特化结构。 2 膜蛋白 虽动物细胞主要有 9 种膜脂，而膜蛋白的种类繁多，多数膜蛋白分子数目较少，但却赋予细胞膜非常重要的生物学功能。 根据膜蛋白分离的难易及其与脂分子的结合方式，膜蛋白可分为两大类型：外在膜蛋白、内在膜蛋白。 (1) 外在膜蛋白为水溶性蛋白，靠离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来，膜结构并不被破坏。 (2) 内在膜蛋白与膜结合非常紧密，一般讲只有用去垢剂(detergent)使膜解后才可分离出来。 获得大量有生物学活性的质膜蛋白对我们显得非常的重要。 附注：使用分级抽提方法获得的“膜蛋白”中只有很少一部分是具备多跨膜区的整和膜蛋白，膜蛋白，到目前为止，仍然是蛋白组学的一个瓶颈，不管采用２－Ｄ技术也好，ＩＣＡＴ乃至proein microarray 都还不能有效解决这一问题。 二、蛋白抽提 谈及蛋白分离，我们想到：超速离心，盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法……有时这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化。由于蛋白质种类繁多，不同的蛋白质由于结构和组成的差异，其溶解度也各不相同.根据蛋白质的溶解特性，同时可选择不同的溶剂提取，分为水溶液提取和有机溶剂提取. 但是针对膜蛋白的提取与细胞质蛋白，核蛋白提取不同之处在于它是嵌在膜中的，水溶性不好，基本方法就是用不同...