急性不同强度至力竭运动对大鼠肝细胞凋亡的影响基金项目：湖南省 2024 年自然科学基金资助课题(29040214)关键词：细胞凋亡；运动；肝细胞；线粒体钙离子观察急性力竭运动后肝细胞凋亡现象，以此来探讨运动对肝细胞凋亡的影响，寻求运动与肝细胞凋亡的相关性，探讨肝细胞凋亡与运动损伤、运动性疲劳的关系，为科学训练提供实验依据。1 讨论对象与方法1．1 讨论对象 成年雄性 SD 大鼠 30 只，由中南大学湘雅医学院动物学部提供。体重 219．2±19．5g，分笼饲养，自由饮食，国家标准啮齿类动物饲料饲养(中南大学湘雅医学院动物学部提供)。室温 20～℃24 光照时间为 7：00～19：00。1．1．1 运动方式 将 30 只大鼠随机分为对比(C，n＝10)和运动实验(E，n＝20)两大组，运动实验组又分为中等强度至力竭运动组(ME，n＝10)和大强度至力竭运动组(HE，n＝10)。实验前所有动物均未进行过运动训练。大鼠进行 3d 的运动跑台适应(速度为 10m／min，时间为 10min／d，坡度为 0‘)。正式实验时，跑台坡度为 10°，运动强度依据 Bedford所建立的运动负荷模型，中等强度运动组以 19．3m／min(相当于76％VO2max)的速度运动至力竭，大强度运动组以 26．8ndmin(相当于92．3％V02max)的速度运动至力竭。1．12 力竭标准 到运动末期，动物未能坚持原跑速，先后滞跑道后 1／3 处达 3 次以上，刺激驱逐无效，停跑后体征表现为呼吸急促，神情倦怠，腹卧位，对刺激反应迟钝。1．1．3 标本制备 对比组与运动组大鼠分别于宁静状态和运动后即刻断头处死，取肝左侧叶，一部分用于电镜观察，一部分投入 3．7％的福尔马林缓冲固定液中固定 4～8h 后进行常规石蜡包埋。取样本 0．2s 左右，剪碎后按 1：9 的比例加入 9％的冰生理盐水，用电动匀浆机在冰水浴中进行匀浆，匀浆液 3500·r／min 离心 10min，提取上清液，即制备10％组织匀浆液。1．2 指标检测1．2．1 细胞凋亡检测 采纳末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记法(terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnickendlabeling，TUNEL)进行细胞凋亡检测，TUNEL 试剂盒产自德国 R&D 公司，购于深圳晶美生物公司。1．2．2 HE 染色 5lan 厚的石蜡肝左侧叶组织横切片常规脱蜡入水后用 HE 染色法进行染色，细胞核染成蓝色，胞质染成红色，观察肝细胞的整体结构。1．2．3 线粒体钙离子的测定 取 10％的组织匀浆液 0．2mL 以8000—10000r／min 离心 1...
