抗 Stat3 多克隆抗体的制备和其在乳腺癌诊断中的应用【摘要】 目的： 制备兔抗信号转导与转录激活因子 3 抗体，分析其在乳腺癌诊断中的价值. 方法： 应用人工重组小鼠Stat3 蛋白，免疫雄性家兔制备抗 Stat3 抗体；用免疫印迹法分析检测抗 Stat3 抗体的纯度和特异性；应用免疫组化染色法检测 65 例乳腺癌和 30 例正常乳腺组织中Stat3 蛋白的表达. 结果： 用 Stat3 蛋白免疫家兔被免疫 6 wk 后，其血清中抗Stat3 抗体效价 1∶256,000；SDSPAGE 和免疫印迹分析均在分子质量 92 000 处有明显的带；65 例乳腺癌组织的细胞浆和细胞核中，Stat3 蛋白表达量在不同的组织学分级之间有统计学差异(). 结论： 高效价和特异性强的抗 Stat3 抗体被成功制备. 该抗体可用于乳腺癌组织细胞 Stat3 蛋白表达的检测. 【关键词】 信号转导与转录激活因子3；抗体；乳腺肿瘤；组织学分级 0 引言 信号转导与转录激活因子 3(signal transducer and activator of transcription; Stat3)是一类脱氧核糖核酸结合蛋白，于细胞浆内有少量表达，细胞核内无表达，是信号转导与转录激活因子家族的重要成员之一. 异常的信号转导使 Stat3 磷酸化而被持续激活，促进细胞的恶性转化进行，Stat3 阳性表达为细胞质呈棕黄色云雾状，细胞核呈棕色颗粒状. 每个视野中阳性细胞 50 %为强阳性，5%～50 %的为阳性，5 %为阴性. Stat3 蛋白胞质表达：细胞质呈深棕色云雾状 80%，细胞质呈棕色云雾状 50 %，细胞质呈棕黄色云雾状 5%～50 %，细胞质呈淡棕黄色云雾状 5 %. Stat3 蛋白胞核表达：细胞核呈深棕色颗粒状 80%，细胞核呈棕色颗粒状 50 %，细胞核呈棕黄色颗粒状 5%～50 %，细胞核不染色或呈淡棕黄色颗粒状 5 %. 统计学处理： 免疫组化染色所得结果用 SPSS 软件分析，统计方法为非参数秩和检验，Spearmans 等级相关. 为有统计学意义. 2 结果 兔抗 Stat3 血清效价基础免疫后 2, 3, 5, 6 wk 分别实行静脉血，间接 ELISA 法检测抗 Stat3 抗体的血清效价，分别为1∶6400, 1∶32000, 1∶240000 和1∶256000(A450 nm=). 抗 Stat3 抗体的特异性和纯度鉴定Stat3 蛋白经 SDSPAGE 分离，用考马斯亮蓝R250 染液染色，分离出 1 条 Mr 为 92 000的蛋白条带，大小与 Stat3 理论值相符. 将凝胶中的 Stat3 转移至 PVDF 膜，用制备好兔抗 Stat3 抗体进行免疫印迹，也出现Mr 为...
