微生物的培养与应用考点 131 生物技术手段——微生物实验室培养1．培养基的类型及作用划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴别用 途选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)2.培养基的配制原则和营养构成 (2)培养基的营养构成① 各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。② 不同培养基还要满足不同微生物对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。3．配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项(1)步骤：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板(2)注意事项① 倒平板的温度一般在 50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。② 平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4．纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。(2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。① 平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如下图)注意 a．划线时最后一区域不要与第一区域相连。b．划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。② 稀释涂布平板法Ⅰ.系列稀释操作(图 1)a．将分别盛有 9 mL 水的 6 支试管灭菌，并按 101～106 的顺序编号。b．用移液管吸取 1 mL 培养的菌液，注入 101 倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸 3 次，使菌液与水充分混匀。c．从 101 倍稀释的试管中吸取 1 mL 稀释液，注入 102 倍稀释的试管中，重复 b 步混匀操作。以此类推，直到完成最后 ...
