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土壤中放线菌的分离与纯化

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土壤中放线菌得分离与纯化实验目得1掌握放线菌得生长特性,微生物得培育方法。2 掌握微生物实验得基本生物技术,主要包括无菌操作技术,纯种分离技术,纯种培育技术,以及抗生素检测等.3 掌握合成培育基,选择培育基得制备方法.4学习对微生物实验得中出现问题得分析,解决方法实验材料药品:可溶性淀粉、KNO3、Na C l、K2H PO 4•3 H 2O、M gSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、琼脂、重铬酸钾其她:高压蒸汽灭菌锅、扭力天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、试管、牛皮纸、硫酸纸、线绳、无菌培育皿、铁锹、小铲、酒精棉球、镊子、玻璃铅笔。实验原理放线菌就是重要得抗生素产生菌,主要分布在土壤中(主要就是链霉菌),其数量仅次于细菌.一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好得土壤中含量较多.由于土壤中得微生物就是各种不同种类微生物得混合体,为了讨论某种微生物,就必须把它们从这些混杂得微生物群体中分离出来,从而获得某一菌株得纯培育。分离放线菌常用稀释倒平板法.根据放线菌得营养、酸碱度等条件要求,常选用合成培育基或有机氮培育基。假如培育基成分改变,或土壤预先处理(120℃热处理 1 h),或加入某种抑制剂(如加数滴10%酚等),都可以使细菌,霉菌出现得数量大大减少,从而淘汰了其它杂菌。再通过稀释法,使放线菌在固体培育基上形成单独菌落,并可得到纯菌株.放线菌可以产生抗生素,抑制其她菌种得生长,故可用金黄色葡萄球菌(G+)与大肠杆菌(G-)作指示菌鉴别放线菌。高氏一号合成培育基就是培育放线菌得培育基。这种培育基就是采纳化学成分完全了解得纯试剂配制而成得培育基,高氏一号培育基:碳源为可溶性淀粉、氮源为 KN O 3 、NaCl 、K 2H PO4•3 H2O 、MgS O 4•7 H2O 作为无机盐,Fe SO 4•7 H 2O 作为微生物得微量元素,提供铁离子等组成1、高氏一号合成培育基得制备K2HPO 4 •3H 2 O 0。125 g,可溶性淀粉5 g,硝酸钾 0、25, M g S O 4•7H2O0.125g, FeSO4•7H2O 0。0 25g,氯化钠 0.1 2 5g,琼脂5 g,水 25 0 m l.配制时,先依次加入上述药品(除琼脂外)顺序溶解,加入无菌水至250ml,调节 pH=7、4,再加入琼脂不断搅拌震荡至溶化后, 12 1℃灭菌20分钟。将 6 套平皿、1 2 只试管灭菌.2、 土壤中放线菌得分离1。编号,分装:取 6 套无菌平皿,在皿底贴上标签,注明土壤稀释液得稀释度(1 0—3、1 0—4、10-5)。每个稀释度做两个...

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