革兰氏染色的机理和步骤

1.革兰氏染色得机理与步骤机理:G+、G-主要由其 CW 化学成分得差异而引起对乙醇得通透性,抗脱色能力得差异。主要有肽聚糖得厚度与结构所决定。G+得 CW:肽聚糖层厚,脂质含量低。乙醇脱色时 CW 脱水,孔径减少,透性降低,不易脱色,呈初染得蓝紫色。G-得 CW:肽聚糖层薄,脂质含量高。乙醇脱色时,类脂被乙醇溶解,透性升高,细胞被复染显红色。步骤:① 涂片:在洁净得载玻片上滴一滴水,用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。 ② 固定:将玻片靠近酒精灯火焰,蒸干水分,但不要烤焦。 ③ 初染:用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。 ④ 媒染: 以碘液媒染 1min,水洗,吸干水分。(细胞内形成结晶紫与碘得复合物,增强相互作用) ⑤ 脱色(关键步骤):以 95%得乙醇脱色 30s,应适当振荡均匀,就是乙醇脱色完全。 ⑥ 水洗,吸干。 ⑦ 复染:??(第 2 张)复染 30s,水洗吸干。 ⑧ 干燥镜检。2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。 芽孢得耐热性在于芽孢衣对多价阳离子与水分得透性很差,以及皮层得离子强度很高,这就使皮层产生了极高得渗透压去夺取芽孢核心中水分,其结果造成皮层得充分膨胀与核心得高度失水,正就是这种失水得核心才给予芽孢极强得耐热性。3、引起微生物培育过程中 PH 变化得几种可能反应,并说明如何能够维持微培 PH 稳定。答:培育过程中,由于营养物质被分解利用,代谢产物得形成与积累,会导致 PH 变化。(第 2 张中得图)还与培育基得 C/N 比有关,C/N 高,经培育基后 PH 显著下降,C/N 低,经培育基后 PH 明显上升。PH 调节:① 加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐,K2HPO4 呈碱性,KH2PO4 酸性,只在一定得 PH 范围内调节(6、4--7、2)② 大量产酸得菌株,加 CaCO3 调节,CaCO3 难溶于水,不会使培育液得PH 过度增加,但可不断中与微生物产得酸。③ 培育液中存在天然得缓冲系统,如 AA,肽,Pr 均属两性电解质,也起缓冲得作用。④ 过 酸 : 治 标 ------ 加 NaOH 、 Na2CO3 中 与 , 治 本 ----- 加 适 量 氮源:NaNO3、Pr、NH3·H2O;增加通风量。⑤ 过碱:治标-----H2SO4、HCl 中与,治本----加适量碳源:G 类,脂类;减小通风量。3、抗生素法与菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？抗生素法(青霉素法):适用于细菌。原理:青霉素抑制肽聚糖链间得交联,组织了合成完整得 CW,野生型 B 处于正常生长繁殖,所以对青霉素敏感,可被抑制或杀死;营缺 B 在基本培育基上休眠状态存活下来,从而达到浓缩营...