Maresin1诱导的炎症消散对阿尔茨海默病的保护作用

Maresin1 诱导的炎症消散对阿尔茨海默病的保护作用慢性炎症是 AD 的主要病理改变之一,近年讨论显示导致慢性炎症的主要原因是炎症消散障碍。炎症消散由炎症消散因子 SPMs 介导。已有讨论证实炎症消散因子 Ma R1 能提高神经元生存率并增强小胶质细胞对 Aβ42 的吞噬,但是 Ma R1 在 AD 患者海马和内嗅皮质显著减低,Ma R1 降低可引起 Aβ 清除障碍、过度沉积,进而加重炎症反应,导致慢性炎症。因此给予 Ma R1 诱导炎症消散可能成为治疗 AD 的新方法。讨论目的:明确 Ma R1 对小胶质细胞趋化、激活、表型的极化、炎性因子分泌的影响和相关信号通路,进而对 AD 小鼠行为学的影响。讨论方法:第一部分体外实验:1.Ma R1 对小胶质细胞趋化的影响的讨论:原代神经元种于 6 孔培育板底部,趋化小室置于 6 孔板中,将绿色荧光标记物 CFSE 标记的小胶质细胞种于趋化小室中。实验分八组:Vehicle 组(即正常对比组)、Aβ42 组、Aβ42+低浓度 Ma R1组(0.005μmol/L)、Aβ42+中浓度 Ma R1 组(0.05μmol/L)、Aβ42+高浓度 Ma R1 组(0.5μmol/L)、低浓度 Ma R1 组(0.005μmol/L)、中浓度 Ma R1 组(0.05μmol/L)、高浓度 Ma R1 组(0.5μmol/L)。于 6、16、24h 后流式细胞仪检测 CFSE 阳性细胞数分析小胶质细胞趋化。2.Ma R1 对小胶质细胞表型及激活“开-关”信号的影响:前期实验发现 Ma R1 浓度变化对小胶质细胞趋化影响不大,故以下实验 Ma R1 只采纳一个浓度;只在 6h 时间点各组趋化的小胶质细胞数目有统计学差异,故以下实验只选取 6h 时间点。小胶质细胞与神经元共培育 24h 后,实验分组:Vehicle 组、Aβ42 组、Ma R1 组、Aβ42+Ma R1 组。6h 后流式细胞仪分析小胶质细胞激活“开-关”信号 CD200-CD200R、表型CD40、CD183 变化;CBA 方法检测共培育细胞上清中炎性因子、趋化因子改变;蛋白质组学筛选出现改变的蛋白通路,并用 western blot 方法进行验证。第二部分体内实验:3-4 月龄雄性 C57BL6/J 小鼠 40 只,随机分为 Vehicle 组、Aβ42 组、Ma R1 组、Aβ42+Ma R1 组。Aβ42 组小鼠采纳双侧海马注射 Aβ42 制作 AD 动物模型,Ma R1 组和Aβ42+Ma R1 组于海马注射前脑室内注射 Ma R1。造模后 7d 利用水迷宫评价小鼠行为学改变;Fluoro-Jade B 染色及免疫组织化学染色方法观察海马和皮层神经元退变和胶质细胞活化;CBA 和 ELISA 方法检测海马和皮层脑组织炎...