基因工程的基本工具VIP专享VIP免费

1.1DNA1.1DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具思考：思考：普通棉花变异抗虫基因基因工程：导入普通棉花细胞内筛选含有抗虫基因的细胞（目的基因）（受体细胞）（转基因生物）抗虫棉抗虫棉植物组织培养作用位点示意图一、一、DNADNA重组技术的基本工重组技术的基本工具具准确切割DNA的工具（“分子手术刀”）——限制性核酸内切酶DNA片段的连接工具（“分子缝合针”）——DNA连接酶基因转移工具（“分子运输车”）——运载体思考思考在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。相关的实例？现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源DNA的入侵而灭绝，仍能保持一种稳定状态？怎样才能使外来的DNA失效从而保护自身？（一）限制性核酸内切酶（一）限制性核酸内切酶1、分布：主要在原核生物中。2、化学本质：蛋白质3、作用特点:专一性（1）每种限制酶只能识别DNA分子中特定核苷酸序列；（2）在每条链中特定的两个核苷酸之间进行切割（切割磷酸二酯键）举例：EcoR1限制酶、Sma1限制酶限制酶的识别序列的特点：以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列如：GAATTCCCCGGGCTTAAGGGGCCC黏性末端黏性末端EcoRI被限制酶切开的被限制酶切开的DNADNA两条单链的切口，两条单链的切口，带有几个带有几个伸出的核苷酸伸出的核苷酸，他们之间正好，他们之间正好互互补配对补配对，这样的切口叫，这样的切口叫黏性末端黏性末端。。学科网4、作用结果：黏性末端平末端（1）从链状DNA分子上获得某特定基因片段必须要用限制酶切几次？可产生几个黏性末端？（2）如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，结果如何？思考：DNADNA连接酶连接酶GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG同种限制酶切割（二）（二）DNADNA连接酶连接酶1、特点：在两条DNA链之间形成磷酸二酯键2、分类：（1）E·coliDNA连接酶：只连接互补的黏性末端（2）T4DNA连接酶：连接互补的黏性末端和平末端3、化学本质：蛋白质下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是()A．①②③④B．①②④③C．①④②③D．①④③②DNA连接酶DNA聚合酶成分蛋白质作用部位催化形成磷酸二酯键作用过程将DNA片段的末端连接起来将单个脱氧核苷酸连接到DNA单链上作用结果将存在的DNA片段连接成重组DNA新DNA分子模板不需要需要DNA的一条链为模板区分：DNA聚合酶和DNA连接酶下图表示两种限制性核酸内切酶识别DNA分子的特定序列，并在特定位点对DNA进行切割的示意图，请回答以下问题。(1)图中甲和乙代表_____________________________。(2)EcoRⅠ、HpaⅠ代表__________________________。(3)图中甲和乙经过相应操作均形成两个片段，切口的类型分别为________、________。甲中限制性核酸内切酶的切点是______之间，乙中限制性核酸内切酶的切点是________之间。(4)由图解可以看出，限制性核酸内切酶的作用特点是____________________________________________。(5)如果甲中G碱基发生基因突变，可能发生的情况是____________________________________________。【答案】(1)有特殊脱氧核苷酸序列的DNA片段(2)两种不同的限制性核酸内切酶(3)黏性末端平口末端G、AA、T(4)能识别双链DNA分子的特定脱氧核苷酸序列，并从特定的位点将DNA分子切割(5)限制性核酸内切酶不能识别切割位点1、要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，需将这个基因送到乙生物的细胞内去，且能稳定存在，需要将目的基因与谁连接？2、作为载体没有切割位点将怎样？3、目的基因是否进入受体细胞，如何鉴别？思考：1、具备条件：（1）能在宿主细胞内复制，并稳定地保存便于目的基因扩增（2）具有一个至多个点限制酶切点；便于目的基因插入（3）具有标记基因鉴定和筛选含有目的基因的受体细胞（4）对受体细胞无害（三）基因进入受体细胞的载体（三）基因进入受体细胞的载体2、载体作用（1）作为运载工具，携带目的基因进入受体细胞；（2）在受体细胞内对目的基因进行大量的复制和保存3、种类（1)质粒（...