限制性内切酶1VIP专享VIP免费

限制性核酸内切酶概念限制性核酸内切酶是一类能够识别双链DNA分子中的某链的核酸内切酶。主要存在于原核生物，是原核生物自我保护的一种机制（限制修饰系统）。类似于DNA测序中的化学修饰法第1个字母取自它来源细菌的种名的头自它来源细菌的种名的头22个字母，小写个字母，小写第4个字母代表株最后用大写罗马数字，代表同一菌株中不同限制酶的编号最后用大写罗马数字，代表同一菌株中不同限制酶的编号命名限制酶由三部分构成，即菌种名、菌系编号、分离顺序。HindⅢ属系株序Haemophilusinfluenzaed株流感嗜血杆菌d株的第三种酶限制性内切酶的类型根据限制性内切酶的根据限制性内切酶的识别位点识别位点和和切割位点切割位点以以及所需要的辅分为及所需要的辅分为33种不同类型。种不同类型。II型：切割位点不确定，不适用于基因工程。型：切割位点不确定，不适用于基因工程。ⅡⅡ型：基因工型：基因工识别位点，对分子克隆操作识别位点，对分子克隆操作亦无实用意义。亦无实用意义。www.sysmk120.comwww.hzdiyan.com首先由M.Meselson和R.Yuan在1968年从大肠杆菌B株分离得到。I型限制性内切酶作用原理：识别双链DNA未甲基化修饰的特异序列，别位点约1000-1500bp处随机切开一条单链，造成大约75个核苷酸的切口。首先由H.O.Smith和K.W.Wilcox在1970年从流感嗜菌株中分离出来。作用原理：识别双链DNA上未甲基化修饰的一小段明确的序列（文序列），然后在识别位点之内的特定位置切割。II型限制性内切酶•一般性状一般性状对热不稳定，通常是溶于含有50％甘油的缓冲液中贮存于–20℃环境下。取出使用时必须立即置于冰浴中。NaCl有抑制作用，能被Mg2+激活，巯基有保护作用，•识别序列识别序列通常识别的是通常识别的是4-8bp4-8bp的回文序列，多为的回文序列，多为6bp6bp，，在识别序列内或其附近水解在识别序列内或其附近水解DNADNA链中的磷酸二酯链中的磷酸二酯键。键。•酶切切口酶切切口齐平末端：齐平末端：在识别序列内的在识别序列内的对称轴上切割对称轴上切割，其，其切割产物具（不易重新连接）。切割产物具（不易重新连接）。粘性末端：粘性末端：在识别序列在识别序列22条链对应位上条链对应位上错位切错位切割割，有，有55’’端突出的粘性和端突出的粘性和33’’端突出的粘性末端突出的粘性末端。端。粘性末端的意义：粘性末端突出的单链部分可以与相同的酶或粘性末端的意义：粘性末端突出的单链部分可以与相同的酶或同尾酶同尾酶切割得到的粘性末端的单链部分互补配对。切割得到的粘性末端的单链部分互补配对。5’5’NNNNNNNNNNNNGTTAACGTTAACNNNNNNNNNN33‘‘3’3’NNNNNNNNNNNNCAATTGCAATTGNNNNNNNNNN5‘5‘5’5’NNNNNNNNNNGTTGTTpAACpAACNNNNNNNNNN3’3’3‘3‘NNNNNNNNNNCAApCAApTTGTTGNNNNNNNNNN55’’HaeHaeⅠⅠ的识别序列和酶切切口（平端）的识别序列和酶切切口（平端）5’5’NNNNNNNNNNNNNNGAATTCGAATTCNNNNNNNNNNNNNNNN3’3’3’3’NNNNNNNNNNCTTAAGCTTAAGNNNNNNNNNNNNNNNN5’5’5’5’NNNNNNNNNNGG3’3’NNNNNNNNNNCTTAApCTTAApEcoEcoRⅠRⅠ的识别序列和酶切切口（粘端）的识别序列和酶切切口（粘端）pAATTCpAATTCNNNNNNNNNNNN3'3'GGNNNNNNNNNNNN5’5’PstPstII的识别序列和酶切切口（粘端）的识别序列和酶切切口（粘端）CTGCAGGACGTC5’--3’3’--5’5’--3’3’--5’CTGCAGGACGTC同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。XmaI5’-CCCGGG-3’3’-GGGCCC-5’SmaI5’-CCCGGG-3’3’-GGGCCC-5’HinHinddⅢⅢ5’-A5’-AAGCTTAGCTT--3’3’3’-TTCGA3’-TTCGAA-5’A-5’HsuHsuI5’-AI5’-AAGCTTAGCTT-3’-3’3’-TTCGA3’-TTCGAA-5’A-5’完全同裂酶不完全同裂酶5’-G5’-GGATCGATCC-C-3’3’3’-3’-CCTAGCCTAGG-G-5’5’BamBamHIHIBclBclII5’-T5’-TGATCGATCA-3’A-3’3’-3’-ACTAGACTAGT-5’T-5’5’-5’-AAGATCGATCT-3’T-3’3’-3’-TCTAGTCTAGA-5’A-5’BglBglⅡⅡ5’-5’-UUGATCGATCY-3’Y-3’3’-Y3’-YCTAGCTAGU-5’U-5’XhoXhoⅡⅡUU代表嘌呤代表嘌呤YY代表嘧啶。代表嘧啶。同...