HPLC外内标法测定含量VIP专享VIP免费

采用HPLC外标法测定栀子中栀子苷的含量仪器与试剂Aglient1100seriesHPLC仪(包括VWD检测器、四元恒流泵、在线脱气机、手动进样器)，美国安捷伦公司；SB3200超声波清洗器，宁波新芝生物科技公司。栀子苷对照品：中国药品生物制品检定所，供含量测定用；甲醇、乙腈为色谱纯，Merck公司；栀子药材；其他试剂均为分析纯。实验步骤配制溶液–(1)流动相的配制。甲醇-0．5％冰乙酸水(1：1，V／V)，减压过滤并超声波脱气。–(2)栀子苷对照品溶液的配制。称取10．0mg栀子苷对照品，精密称定质量，以甲醇溶解，转移至2mL容量瓶巾(浓度为0．4g／L)，甲醇定容，分别精密移取0．1，0．5，1．0，2．5，5．0mL于10．0m1．容量瓶中，以流动相溶液定容，得浓度为0．004，0．02，0．04，0．1，0．2g／L的栀子苷对照品溶液。–(3)栀子供试品溶液的配制。取本品粉末0．1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理20min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。平行处理3份。测定(1)安装C18反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。(2)色谱条件。C18一ODS色谱柱(53um，4．6mm×250mm)；流动相比例：甲醇-0．5％冰乙酸水(1：1)；流动相流速：1．0mL／min；检测波长：238nm。(3)换卜流动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为0．004，0．02，O．04，0．1，0．2，0．4g／L的栀子苷对照品溶液各10仙L进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键停止分析。记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，以栀子苷进样浓度(g／L)为横坐标，色谱峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归分析。(4)采用进样器吸取栀子样品溶液10¨L，进样，通过保留时间确定栀子苷色谱峰的位置，记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算栀子药材中栀子苷的含量。结果实验结果实验结果实验结果栀子药材中栀子苷的含量测定采用进样器吸取栀子样品溶液10“L，进样，记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算栀子药材中栀子苷的含量。实验结果表明，栀子药材中栀子苷的含量为3．01％采用HPLC内标法测定待测溶液中扑热息痛和阿司匹林的含量仪器与试剂Aglientl100seriesHPLC(VWD检测器、四元恒流泵、在线脱气机、手动进样器)，美国安捷伦公司；SB3200超声波清洗器，宁波新芝生物科技公司。扑热息痛(CP，含量>98％)，国药集团化学试剂有限公司；阿司匹林(CP，含量>98％)，国药集团化学试剂有限公司；咖啡因(CP，含量>98％)，ALFAAESAR，AJOHNSONMATTHEYCOMPANY；甲醇、乙腈为色谱纯，Merck公司。实验步骤配制溶液(1)流动相的配制。乙腈一0．1％磷酸水(20：80，V／V)，减压过滤并超声波脱气。(2)对照品溶液的配制。分别称取40mg扑热息痛和50mg阿司匹林，精密称定质量，于10mL容量瓶中，加少量甲醇超声溶解，甲醇定容，即得4．0g／L的扑热息痛、5．0g／L的阿司匹林的混合对照品溶液A。称取50mg的咖啡因，精密称定质量，于10mL容量瓶中，加少量甲醇超声溶解，甲醇定容，即得5．0g／L的咖啡因内标溶液B。分别精密移取0．1，0．5，1．0，2．5，5．0mL的混合对照品溶液A和1．0mL的咖啡因内标溶液B于25．0mL容量瓶中，溶解，混匀，以甲醇定容，即得浓度分别为0．016，0．08，0．16，0．4，0．8g／L扑热息痛和0．02，0．10，0．20，0．50，1．0g／L阿司匹林、内标物咖啡因浓度为0．2g／L的5种混合对照品溶液。(3)供试品溶液的配制。精密移取待测样品溶液5mL和1．0mL的B于25mL的容量瓶中，溶解，混匀，以甲醇定容，并平行处理3份。测定(1)安装C18。反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。(2)色谱条件：C18一ODS色谱柱(5um，4．6mm×250mm)；流动相比例：乙腈一0．1％磷酸水(20：80，V／V)；流动相流速：1．0mL／min；检测波长：273nm。(3)换上流动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为0．016、0．08、0．16、0．4、0．8g／L扑热息痛和0．02、0．10、0．20、0．50、1．0g／L阿司匹林、内标物咖啡因浓度为0．2g／L的5种混合对照品溶液各10uL进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键停止分析。记录...