细胞培养常用技术细胞培养常用技术Cell第一类研究方法形态观察技术形态观察技术第二类研究方法生物化学分析技术生物化学分析技术第三类研究方法V细胞生理学技术细胞生理学技术第四类研究方法其它实验技术其它实验技术第一节细胞形态结构观察技术第一节细胞形态结构观察技术目镜物镜集光器载物台光源1.普通光镜的结构:（一）普通光学显微镜（一）普通光学显微镜一、光学显微镜一、光学显微镜一、光学显微镜一、光学显微镜2.普通光镜的成像原理22图像样品光线聚光器物镜光学显微镜的光路图分辨率分辨率分辨率分辨率指显微镜能将近邻的两个质点分辨清楚的能力，通常是用相邻两点间的距离来表示.与数值孔径的关系：与数值孔径的关系：D=0.61λ/ND=0.61λ/NA=0.61λ/N·sin(α/2)A=0.61λ/N·sin(α/2)DD为分辨率为分辨率;λ;λ为光波波长为光波波长;;要提高分辨要提高分辨率，可采取使用短波长光源、采用介质折率，可采取使用短波长光源、采用介质折射率高的袖浸系、增大孔径角以提高射率高的袖浸系、增大孔径角以提高NANA值值等措施。等措施。倒置显微镜倒置显微镜倒置显微镜倒置显微镜生长良好的细胞，在显微镜下可观察到生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明细胞透明度大，折光性强，轮廓不清度大，折光性强，轮廓不清。。若细胞生长状态不良，可见若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物有时细胞表面及周围出现丝絮状物。。细胞的生长状态细胞的生长状态BMSCsBMSCs培养细胞的生长过程Anip973Anip973在普通光学显微镜下，细胞结构呈半透明状半透明状，不易看清。往往将标本切片进行染色——提高可辨程度。移动臂移动臂蜡或树脂包埋的样品蜡或树脂包埋的样品切片用钢刀切片用钢刀样品切片蜡带样品切片蜡带伸展在盖玻片和伸展在盖玻片和载玻片之间的切片载玻片之间的切片切片机染染色色的的原原理理未染色未染色已染色已染色((二二))暗视野显微暗视野显微镜镜((二二))暗视野显微暗视野显微镜镜这种显微镜使照明光线不能直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜。中央遮光板暗视野聚光器的设计原理视野的背景黑物体的边缘亮利用这种显微镜能见到小至5nm的质点，分辨率比普通显微镜高了40倍，有一些细胞器，如核、线粒体，均清晰可见。((三三))相差显微相差显微镜镜((三三))相差显微相差显微镜镜由荷兰物理学家F.Zernike(1932)发明：提高了活细胞结构的反差，从而解决了对活细胞观察的难题。获诺贝尔物理奖获诺贝尔物理奖(1953)(1953)(phasecontrastmicroscope)光通过不同密度物质时滞留的时间不同，利用相差板，将厚度的差别转化成明暗的差别，增加反差。特点：在聚光器或光源上加了一环形光阑(annulardiaphragm),在物镜中加了一环形相板(annularphaseplate)。相差显微镜的构造相差显微镜的构造::相差显微镜的构造相差显微镜的构造::上有一环形区，制成凹槽或凸起（亦可涂上特殊物质）：环形区的设计深度（或高度）恰好可使通过此区的光线提前或延后1/4λ光程差。环形光阑环形相板使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。相相差差显显微微镜镜的的构构造造相相差差显显微微镜镜的的构构造造相差显微镜相差显微镜的光路图解的光路图解根据设计，只有未透过标本的直射光可通过相板环形区，而透过标本的偏折光则由相板其他部分通过。两组光线和轴后发生干涉现象。两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（正反差）——结构比周围介质更加变暗。两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（正反差）——结构比周围介质更加变暗。未透过标本的直射光（通过相板环形区）与透过标本的偏折光（由相板其他部分通过）和轴后发生干涉：未透过标本的直射光（通过相板环形区）与透过标本的偏折光（由相板其他部分通过...
