免疫原和抗血清的制备免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备第一节免疫原的制备•免疫原是能够引起机体产生抗体，并能与之发生反免疫原是能够引起机体产生抗体，并能与之发生反应的物质应的物质•一、颗粒性抗原的制备：一、颗粒性抗原的制备：•1.1.颗粒抗原指细胞抗原或细菌抗原。颗粒抗原指细胞抗原或细菌抗原。2.2.细菌抗原：细菌抗原：•HH抗原有动力的菌株抗原有动力的菌株OO抗原抗原100℃100℃2-2-2.5h2.5h为了破坏为了破坏HH抗原，获得抗原，获得OO抗原抗原ViVi抗原抗原•3.3.虫卵、细胞膜颗粒抗原呈乳浊状，多用虫卵、细胞膜颗粒抗原呈乳浊状，多用VV内免疫，内免疫，较少用佐剂作皮内注射较少用佐剂作皮内注射二、可溶性抗原的制备：二、可溶性抗原的制备：组织和细胞粗抗原的制备：组织和细胞粗抗原的制备：1.1.组织和细胞混合抗原的制备：组织和细胞混合抗原的制备：组织匀浆制备：组织匀浆制备：标本要求：新鲜或低温（＜标本要求：新鲜或低温（＜-40℃-40℃）保存的去除表面包膜或）保存的去除表面包膜或结缔组织或一些大血管，脏器应进行灌注，除去血管内残结缔组织或一些大血管，脏器应进行灌注，除去血管内残留血液留血液制备制备处理好组织处理好组织→→0.050.05％％NaN3NaN3生理盐水洗净生理盐水洗净→→剪成小块剪成小块粉碎粉碎→→高速组织捣碎机法高速组织捣碎机法→→2000-3000rpm2000-3000rpm离心离心10min10min研磨法：玻璃匀浆器研磨法：玻璃匀浆器,,乳钵研磨乳钵研磨→→上清上清10000-20000rpm20-30min10000-20000rpm20-30min高速离心高速离心2.2.细胞抗原的制备：细胞抗原的制备：•细胞抗原细胞膜蛋白抗原细胞抗原细胞膜蛋白抗原细胞浆抗原细胞浆抗原细胞核及核膜抗原细胞核及核膜抗原粉碎：粉碎：（（11）反复冻融法）反复冻融法（（22）冷热交替法：适合细菌，病毒蛋白质及核酸）冷热交替法：适合细菌，病毒蛋白质及核酸（（33）超声破碎法：适合于微生物和组织细胞）超声破碎法：适合于微生物和组织细胞细菌，尤其真菌厚膜孢子难破坏细菌，尤其真菌厚膜孢子难破坏（（44）自溶法：利用组织和微生物的自身酶系）自溶法：利用组织和微生物的自身酶系需一定需一定PHPH和温度动物组织和温度动物组织cellcell0-4℃0-4℃微生物室温微生物室温（（55）溶菌酶法：一定）溶菌酶法：一定PHPH（（PH8.0PH8.0），溶菌酶可专一破坏菌胞。），溶菌酶可专一破坏菌胞。蜗牛酶，纤维素酶消化细菌和组织蜗牛酶，纤维素酶消化细菌和组织cellcell（（66）表面活性剂处理法）表面活性剂处理法蛋白质抗原的制备和纯化：蛋白质抗原的制备和纯化：可溶性抗原绝大部分为蛋白质可溶性抗原绝大部分为蛋白质11..超速离心和梯度密度离心法：超速离心和梯度密度离心法：用来分离亚细胞部分及大分子蛋白质用来分离亚细胞部分及大分子蛋白质11）差速离心：高低速交替进行。将大分子物质分离）差速离心：高低速交替进行。将大分子物质分离22）梯度密度离心：区带分离法，通过梯度密度来维持重）梯度密度离心：区带分离法，通过梯度密度来维持重力的稳定性，通常分离的悬液中的颗粒比液体重，要使之力的稳定性，通常分离的悬液中的颗粒比液体重，要使之上浮，必须加入第三种成份，其密度连续或不连续升高，上浮，必须加入第三种成份，其密度连续或不连续升高，即所谓梯度即所谓梯度33）第三种成份多用甘油、蔗糖氯化色，氯化铷）第三种成份多用甘油、蔗糖氯化色，氯化铷适合于少部分大分子抗原，对于大量的中、小分子量的蛋适合于少部分大分子抗原，对于大量的中、小分子量的蛋白质抗原不适用此法白质抗原不适用此法2.2.选择性沉淀法：选择性沉淀法：•用沉淀剂或改变某些条件促使抗原成分沉淀用沉淀剂或改变某些条件促使抗原成分沉淀11）核酸除去法：）核酸除去法：（（11）提取沉淀剂：）提取沉淀剂：（（22）核糖核酸酶降解法：用）核糖核酸酶降解法：用DNADNA或或RNARNA酶与提酶与提取液作用取液作用30-60min30-60min（（4℃4℃），即可除去核酸），即可除去核酸22）盐析沉淀法：）盐析沉淀法：（（11）抗原的粗筛）抗原的粗筛33-5033-50％饱和度的硫酸铵％饱和度的硫酸铵（...
