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核酸的重要理化性质VIP免费

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一、核酸的一般物理性质DNA为白色纤维状固体,RNA为白色粉末状固体,都微溶于水,其钠盐在水中的溶解度较大。但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂。(用乙醇从溶液中沉淀核酸)DNA和RNA在细胞中常以核蛋白形式存在,两种核蛋白在盐溶液中的溶解度不同。DNA核蛋白RNA核蛋白0.14mol/LNaCl-+1-2mol/LNaCl+-DNA溶液的粘度很大,而RNA溶液的粘度小得多。核酸发生变性或降解后其粘度降低。核酸受到强大离心力的作用时,可从溶液中沉降下来,其沉降速度与核酸的大小和密度有关。第四节核酸的重要理化性质二、核酸的两性性质及等电点与蛋白质相似,核酸分子中既含有酸性基团(磷酸基)也含有弱碱性基团碱基,因而核酸也具有两性性质。由于核酸分子中的磷酸是一个中等强度的酸,而碱基呈现弱碱性,所以核酸的等电点比较低。(当核酸分子内的酸性解离和碱性解离相等,本身所带的正电荷与负电荷相等时,此时核酸溶液的pH值即为核酸的等电点pI)如DNA的等电点为4~4.5,RNA的等电点为2~2.5。核酸在其等电点时溶解度最小。RNA的等电点比DNA低的原因,是RNA分子中核糖基2′-OH通过氢键促进了磷酸基上质子的解离。DNA没有这种作用。三、核酸的水解1.核酸的酸解和碱解核酸分子中的磷酸二酯键可在酸或碱性条件下水解切断(降解)。酸对核酸的作用因酸的浓度、温度和作用时间不同而不同。嘌呤碱基比嘧啶碱基易被水解下来。DNA和RNA对碱的耐受程度有很大差别。例如,在0.3-1mol/LNaOH溶液中,在室温至370C条件下RNA几乎可以完全水解,生成2′-或3′-磷酸核苷;DNA在同样条件下则不受影响,若加温至1000C,4个小时也可得到小分子的寡聚脱氧核苷酸。这种水解性能上的差别,与RNA核糖基上2′-OH的羟基参与作用有很大的关系。在RNA水解时,2′-OH首先进攻磷酸基,在断开磷酯键的同时形成环状磷酸二酯,再在碱的作用形成水解产物。2、核酸的酶解生物体内存在多种核酸水解酶。这些酶可以催化水解多聚核苷酸链中的磷酸二酯键。以DNA为底物的DNA水解酶(DNases)和以RNA为底物的RNA水解酶(RNases)。根据作用方式又分作两类:核酸外切酶和核酸内切酶。核酸外切酶的作用方式是从多聚核苷酸链的一端(3′-端或5′-端)开始,逐个水解切除核苷酸;核酸内切酶的作用方式刚好和外切酶相反,它从多聚核苷酸链中间开始,在某个位点切断磷酸二酯键。(小球菌核酸酶即可外切又可内切)在分子生物学研究中最有应用价值的是限制性核酸内切酶。这种酶可以特异性的水解核酸中某些特定碱基顺序部位。四、核酸的紫外吸收在核酸分子中,由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系,因而具有独特的紫外线吸收光谱,一般在260nm左右有最大吸收峰,可以作为核酸及其组分定性和定量测定的依据。五.核酸的变性、复性与杂交1.核酸的变性(denaturation)与变性因素核酸的变性是指核酸双螺旋区的氢键断裂,变成单链结构的过程。变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。核酸的变性并不涉及磷酸二酯键的断裂,所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。能够引起核酸变性的因素很多。温度升高、酸碱度改变、甲醛和尿素等的存在均可引起核酸的变性。RNA本身只有局部的双螺旋区,所以变性行为所引起的性质变化没有DNA那样明显。利用紫外吸收的变化,可以检测核酸变性的情况。因为天然状态的DNA在完全变性后,紫外吸收(260nm)值增加25-40%.而RNA变性后,约增加1.1%。增色效应:变性后DNA对260nm紫外光的吸收率(A260)比变性前明显增加,这种现象称为增色效应.A260值增加粘度下降浮力密度增大分子量不变2.DNA变性后的表现3.DNA的热变性和解链温度(Tm)用加热的方法使DNA变性叫做热变性DNA的变性过程是突变性的,它在很窄的温度区间内完成。因此,通常将DNA的变性达到50%时,即增色效应达到一半时的温度称为DNA的解链温度(meltingtemperature,Tm),Tm也称熔解温度或DNA的熔点。一般DNA的Tm值在70-85C之间RNA的Tm值tRNA的Tm值G和C的含量高,Tm值高。因而测定Tm值,可反映DNA分子中G、C含量,可通过经验公式计算:(G+C)%=(Tm-69.3)X2.44Tm大小可反映出DNA的均一性:均质DNA的熔解...

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