上海交通大学硕士学位论文遗传性高非结合胆红素血症UGT1A1基因突变与家系分析姓名：沈健申请学位级别：硕士专业：内科学（消化系病）指导教师：吴建新20070501遗传性高非结合胆红素血症UGT1A1基因突变与家系分析摘要目的遗传性高非结合胆红素血症的发病机制在于尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因UGT1A1突变。国外已有不少关于UGT1A1基因突变的报道，国内相关报道很少。本文分析3例该症患者UGT1A1基因突变位点,并进行家系调查，研究我国这类患者的遗传特征。方法采用肝功能试验、低热卡试验及苯巴比妥诱导治疗等方法诊断3例先证者，从先证者及相关家系成员的外周静脉血提取基因组DNA，采用聚合酶链反应(PCR)扩增UGT1A1基因上游苯巴比妥反应增强元件PBREM、启动子TATA盒及第1～5外显子序列,用DNA直接测序法筛查UGT1A1基因突变并作家系分析。对其中2例先证者行肝活检病理检查。结果先证者A低热卡试验血清总胆红素由54.5µmol/L增高至127.0µmol/L。苯巴比妥诱导治疗6天后下降至24.9µmol/L。DNA测序发现，家系A在UGT1A1基因上游PBREM元件处发生T-3279G突变，在启动子TATA盒发生TA插入突变。先证者A及其同胞妹之一在这两个位点都是突变纯合子，血清非结合胆红素水平显著高于其它家系成员。先证者B低热卡试验血清总胆红素由99.1µmol/L增高至247.2µmol/L。苯巴比妥诱导治疗6天后下降至27.8µmol/L。DNA测序发现家系B在UGT1A1基因的第5外显子发生T1456G错义突变,导致了酪氨酸变成了天门冬氨酸(Tyr486Asp)。先证者B为突变纯合子，杂合子家系成员未发病。透射电镜显示先证者B肝细胞内大量色素颗粒，肝细胞间隙增宽，在增宽的间隙内有胶原纤维增生，部分毛细胆管扩张。先证者C低热卡试验血清总胆红素由74.6µmol/L增高至187.3µmol/L。苯巴比妥诱导治疗6天后下降至51.0µmol/L。DNA测序发现家系C在UGT1A1基因的第5外显子也发生T1456G错义突变。先证者C为突变纯合子，杂合子家系成员未发病。先证者C肝组织病理变化与先证者B相似。结论UGT1A1基因PBREM元件的T-3279G突变和启动子TATA盒的A(TA)7TAA突变是家系A发生高非结合胆红素血症的共同病因，两者之间有连锁关系，A(TA)7TAA等位基因对胆红素影响更明显，推测为常染色体隐性遗传。T1456G突变是家系B和家系C携带的导致高非结合胆红素血症的致病性突变，符合常染色体隐性遗传。先证者B和C肝脏组织电镜下超微结构病理改变的意义有待进一步研究。上述家系的UGT1A1基因突变特点均为国内首次报道。关键词遗传性高非结合胆红素血症，UGT1A1，Gilbert综合征，Crigler-Najjar综合征，突变，家系分析，亚细胞结构UGT1A1GENEMUTATIONSANDPEDIGREEANALYSISOFINHERITEDUNCONJUGATEDHYPERBILIRUBINEMIAABSTRACTObjective:InheritedunconjugatedhyperbilirubinemiaisduetomutationsofbilirubinUDP-glucuronosyltransferase(UGT1A1)gene.VariouskindsofmutationsofUGT1A1genehavebeenreportedabroadwhilefewdomesticreportsaredocumentedinmainlandofChina.WeinvestigatedthreepatientsandtheirfamiliesforthemutationsofUGT1A1genealongwiththepedigreeanalysisinordertoelucidatethehereditarytraits.Methods:Theliverfunctiontests,lowcaloriediettestandoralphenobarbitalUGTenzyme-inductiontestwereemployedfordiagnosis.ThegenomeDNAwasextractedfrombloodsamplesofpedigreemembersofeachfamily.Thephenobarbital-responsiveenhancermodule(PBREM)、TATA-boxandfiveexonsofUGT1A1genewereamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR).TheamplifiedDNAfragmentsweredirectlysequencedbeforefamilypedigreeanalysis.Percutaneousliverbiopsywasperformedintwoofthethreeprobandsforhistopathologicobservations.Results:InprobandA,theserumbilirubinwassignificantlyincreasedfrom54.5µmol/Lto127.0µmol/Lafterlowcalorieintakeanddecreasedto24.9µmol/Lafteraweekofdailyoralphenobarbitalinduced-treatment.ThefamilycarriesaT-3279GmutationinPBREMandaTAinsertioninTATA-boxoftheUGT1A1gene.TheprobandAandoneofhisyoungersistersarehomozygouswitht...
