透明质酸测定方法及其临床意义南昌铁路中心医院陆迪生综述透明质酸,是一种线性分子的聚糖,这种胺基多糖是结缔组织基质的主要成份,由纤维母细胞合成,被特异的透明质酸酶降解,最近的研究证明,循环血液中的被肝脏迅速有效地移去,主要是由肝窦上皮细胞将其摄取并降解。虽早在六十年代前就已发现,由于缺乏足够敏感特异的测定方法而限制了它的临床应用研究,近十年左右随着各种测定方法的不断涌现,使含量测定达到精确的程度,并清楚地反映出类风湿性关节炎、肝病、某些肿瘤和硬皮病患者样品内均明显增高,尤其测定在肝硬化诊断上优于所有常规肝功试验,肝硬化患者血清较正常人升高一倍,曲。等认为侧定可作为肝病严重程度的指标。国内张世兰等报告在巨性肝病、肝硬化组增高幅度大于皿型前胶原肤和板层素在慢活肝组中增高大于皿型前胶原肤,在迁肝中则与对照组无差别。由此可见,测定是一项极有价值的肝病诊断指标,为此对其测定方法和临床意义作一简要综述。一、测定方法、生化方法最早测定的方法是等介绍的咔哇显色比色法,在硼离子和浓硫酸介质中经加热分子内的糖醛酸与咔哩反应,生成红色复合物,这一反应产生的颜色稳定,但测定的纷性范围为么一盯玩灵敏度低,不能用于测定血清内微量,同时样品中的单糖寡糖及其它糖胺多糖也可产生颜色反应,故特异性也不高,只能用于定量纯品和关节液内的含量。为提高特异性等人从链霉菌中分离出一种对特异的降解酶,使降解为不饱和的或一寡糖,叮等利用该酶特异地水解,所形成的寡糖经过碘酸氧化再与硫巴比妥酸反应显色,最后以正丁醇抽提,在测定其吸光值,建立了特异性高的化学测定法。但其灵敏度只达林‘水平。由于的低浓度存在和分子量差异的特点一般生化方法难以准确定量,而分子量大小的变化又被认为可能是某些肿瘤的标志。因此采用测定既可了解分子量的变化和分布又可进行定量,随着仪器的普及和提高,相信这一方法将会成为常规实验室的一个项目。、免疫分析方法沙等从牛鼻软骨中提取到一种能被集聚的蛋白多糖,此后又在此种蛋白多糖中分离出能特异识别的片段。至年。孟利用一亲和层析,从牛鼻软骨中分离出与高度特异结合的透明质酸结合蛋白一,证明其含结合部份和连接蛋白两部份,后者的二,的。具有加强与结合蛋白间结合的作用。年,等从人脑提取到一种结合糖蛋白命名为连接素。·也有人从鼠脑中提取了类似物质。尽管这些结合蛋白以不同方法从不同种属动物组织中提出,其结构差异尚未完全明了,但它们的被发现以及它们与免疫学方法的结合,建立了许多特异敏感的检测方法,其检测限达以至水平。国外资料中免疫学检测方法较多,具实用的有放免和酶免疫方法二类,尤以酶免疫方法为多。国内的年张鲁榕等在分子上偶联一特定基因,使’艺‘能标记,建立了竟争性放免分析法,目前按此方法由上海医学研究所生产商品药盒,使测定血清内成为可能,是国内目前唯一的一种测定药盒。其反应体系是先将样品和限量结合,再加入‘“一,竟争剩余,再加入第一抗休抗,最后加入相应第二抗体,以使复合物沉淀,测定沉淀的。药盒可用二个月,检测灵敏度达‘。测得的正常人血清含量为一,操作时间为小时可出结果。原药盒的不足之处是最大结合率在以内,各标准管间落差小,有时标准序列的斜率不够礴意,据陈金国等介绍药盒的非特异结合率偏高,近年经海军医学研究所改进,最大结合率可达,非特异结合率在左右,但受同位素半衰期和标记物脱碘的影响,使用期较短,且受检测仪器限制,不可能普遍开展这一侧定。因此,开发酶免疫药盒,是进一步推广这一项测定使之常规化的关键。、酶免疫试验中代表性的方法有年介绍用牛鼻软骨中提取的蛋白多糖为结合剂,同时以单休免疫家兔获得主要对一单体、硫酸软骨素和结合片段起反应的抗体,建立了一种固相免疫方法,反应系统中先以鱼精蛋白处理微板,以增加的吸附,包被于微板后,加孵育,再加抗反应一小时,洗涤后加,抗兔酶结合物,孵育后,洗涤加底物显色。这一方法具较高特异性、操作简便、快速,作者还用,,单抗体代替多抗进行对比,发现特异性相同。等以包被固相载体,加入样品与之结合,洗涤后再加入生物素标记的,最后加亲和素酶结合物反应后与底物显色,这种夹心法,试剂制备简单,可在六小时内完成测定操作...
