动物细胞培养VIP专享VIP免费

第二章细胞工程第一节动物细胞培养细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。什么叫细胞工程？1.1细胞培养的概念是细胞工程中最基础的技术，它是把机体的某一组织或器官取出，分散为单个细胞，使其在人工培养条件下继续生存、生长、甚至增殖的过程。原理：细胞增殖补充合成培养基中缺乏的物质1.2动物细胞培养的条件：1.无菌、无毒的环境:培养液和所有培养用具进行无菌处理措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液2.营养:糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、激素等）和动物血清3.温度和PH36.5±0.5℃7.2-7.44.气体环境O2CO2(95％空气5％的CO2)1.3动物细胞培养出过程•胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬浮液10代细胞50细胞无限传代剪碎胰蛋白酶洗涤、稀释、分离原代培养用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。动物细胞培养不能最终培养成生物体传代培养细胞株细胞系动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。遗传物质改变细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。•原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。•传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。短期和临时性的保存可以采用一般的低温，如哺乳动物的细胞在4℃左右可存活几十天甚至几个月。长期的保存方法目前一般采用超低温冻存法，即将细胞和保护剂放入-196℃的液氮中进行保存。1.4冷冻和复苏复苏：冷冻保存：随时取出迅速放入37℃温水中解冻1、生物制品：酶、生长因子、疫苗、单克隆抗体等2、有毒物质和药品的检测：将待测物质加入培养液，根据变异细胞占全部细胞的比例来判断该物质的毒性。3、临床治疗：人工皮肤4、基础研究：细胞全能性、细胞周期及调控、癌变机理与细胞衰老的研究1.5动物细胞培养的应用1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（）A．细胞系B．细胞株C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是-----（）A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养AD3、为了使用于培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度的细胞悬浮液，选取来的动物组织应选用下列哪种物质处理（）A.胃蛋白酶B.胰蛋白酶C.盐酸D.胰脂肪酶教学反馈B4、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）A.容易产生各种变异B具有更强的全能性C.取材十分方便D分裂增殖的能力强D5、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（）A．动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋白B．动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散C．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中D．培养至50代后继续传代的细胞是细胞株6、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为（）A．原代培养B．传代培养C．细胞株D．细胞系BD7、动物细胞培养的正确过程是（）A.原代培养→传代培养→细胞株→细胞系B.原代培养→传代培养→细胞系→细胞株C.传代培养→细胞系→原代培养→细胞株D.原代培养→细胞系→传代培养→细胞株8、下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是（）A．培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清B．原代培养的细胞一般传至10代左右...