《边做边学 目的DNA片段的体外扩增》导学案课前自主导学知识1使用PCR仪的安全措施1
严禁在PCR仪运行过程中打开盖子,否则会造成仪器的永久损坏
2.样品池及池盖内表面温度较高,当心灼伤
3.加热器内腔为高温、高压,严禁触及
4.仪器运行过程中如果发出尖锐的刺刮声音,请立即停止运行,检查是否有毛细管断裂等故障
5.仪器运行过程中如果计算机长时间没有反应,仪器也没有任何动作,请切断电源,进行检查
6.任何时候打开机器外壳时候,都必须切断电源
7.必须保持样品池内部清洁,可用体积分数为95%的酒精、湿棉签擦拭相关部位
8.仪器必须放置在PCR实验室里,操作者在操作的时候必须遵循PCR实验室的相关规定,做好穿防护服、戴防护手套等相关防护措施
9.当仪器接通电源后,打开外壳或移走部件可能会造成人员伤害,因此,在进行任何调整、替换、保养或维修之前,请切断所有的电源
知识2聚合酶链式反应程序1
向离心管中加入模板DNA、脱氧核苷酸引物和4种脱氧核苷酸以及Taq聚合酶
2.变性:在94 ℃高温下作为模板的双链DNA解旋成为单链DNA
3.退火(复性):反应体系的温度降至40~60 ℃,使得引物与作为模板的单链DNA上特定部位相互配对、结合
4.延伸:反应体系的温度回升到72 ℃左右,在单链上4种脱氧核苷酸按照碱基互补配对的原则连接在引物之后,使引物链延伸,形成互补的DNA双链
知识3目的DNA片段的体外扩增一、DNA片段的PCR扩增1.准备器材2.在0
2 mL PCR薄壁离心管中加入5 μL10×PCR缓冲液,dACP、dCTP、dGTP、dTTP各5 μL,1 μL模板,5 μL引物1和5 μL引物2,29 μL双蒸水
3.煮沸5 min之后冰浴2 min,低速离心,按照1单位/μL加入Taq聚合酶
4.扩增DNA片断的反应程序:将离心管放入PCR仪中,盖上样品池盖
在94 ℃的条