《边做边学 目的DNA片段的体外扩增》导学案课前自主导学知识1使用PCR仪的安全措施1.严禁在PCR仪运行过程中打开盖子，否则会造成仪器的永久损坏。2．样品池及池盖内表面温度较高，当心灼伤。3．加热器内腔为高温、高压，严禁触及。4．仪器运行过程中如果发出尖锐的刺刮声音，请立即停止运行，检查是否有毛细管断裂等故障。5．仪器运行过程中如果计算机长时间没有反应，仪器也没有任何动作，请切断电源，进行检查。6．任何时候打开机器外壳时候，都必须切断电源。7．必须保持样品池内部清洁，可用体积分数为95%的酒精、湿棉签擦拭相关部位。8．仪器必须放置在PCR实验室里，操作者在操作的时候必须遵循PCR实验室的相关规定，做好穿防护服、戴防护手套等相关防护措施。9．当仪器接通电源后，打开外壳或移走部件可能会造成人员伤害，因此，在进行任何调整、替换、保养或维修之前，请切断所有的电源。知识2聚合酶链式反应程序1.向离心管中加入模板DNA、脱氧核苷酸引物和4种脱氧核苷酸以及Taq聚合酶。2．变性：在94 ℃高温下作为模板的双链DNA解旋成为单链DNA。3．退火(复性)：反应体系的温度降至40～60 ℃，使得引物与作为模板的单链DNA上特定部位相互配对、结合。4．延伸：反应体系的温度回升到72 ℃左右，在单链上4种脱氧核苷酸按照碱基互补配对的原则连接在引物之后，使引物链延伸，形成互补的DNA双链。知识3目的DNA片段的体外扩增一、DNA片段的PCR扩增1．准备器材2．在0.2 mL PCR薄壁离心管中加入5 μL10×PCR缓冲液，dACP、dCTP、dGTP、dTTP各5 μL，1 μL模板，5 μL引物1和5 μL引物2，29 μL双蒸水。3．煮沸5 min之后冰浴2 min，低速离心，按照1单位/μL加入Taq聚合酶。4．扩增DNA片断的反应程序：将离心管放入PCR仪中，盖上样品池盖。在94 ℃的条件下预热，5min，再设置反应程序为：94 ℃，30 s―→56 ℃，30 s―→72 ℃，30 s(以上过程循环30次)。最后一次延伸条件为72 ℃，5 min。运行反应程序。二、DNA分子的测定1．配制二苯胺试剂2．取一定量的扩增前和扩增后的溶液分别放入两支试管中，加入等量的二苯胺试剂，混匀后观察溶液的颜色。3．根据蓝色的深浅，可以粗略地比较扩增前和扩增后溶液中DNA的含量是否有明显的增加。正误判断1．DNA扩增的变性过程中需要DNA解旋酶的参与。(×)【提示】 是在94 ℃高温解链，不需DNA解旋酶的参与。2．DNA扩增退火过程中需要DNA聚合酶参与。(×)【提示】 只需将温度降至40～60 ...
