pET 载体中,目标基因克隆到 T7 噬菌体强转录和翻译信号控制之下,并通过在宿主细胞提供 T7 RNA 聚合酶来诱导表达
Nov agen 的 pET 系统不断扩大,提供了用于表达的新技术和选择,目前共包括 36 种载体类型、 15 种不同宿主菌和设计用于有效检测和纯化目标蛋白的许多其它相关产品
优点 · 是原核蛋白表达引用最多的系统 · 在任何大肠杆菌表达系统中,基础表达水平最低 · 真正的调节表达水平的“变阻器”控制 · 提供各种不同融合标签和表达系统配置 · 可溶性蛋白生产、二硫键形成、蛋白外运和多肽生产等专用载体和宿主菌 · 许多载体以 LIC 载体试剂盒提供,用于迅速定向克隆 PCR 产物 · 许多宿主菌株以感受态细胞形式提供,可立即用于转化 阳性 pFORCE TM 克隆系统具有高效克隆 PCR 产物、阳性选择重组体和高水平表达目标蛋白等特点
pET 系统概述 pET 系统是在大肠杆菌中克隆和表达重组蛋白的最强大系统
根据最初由 Stu dier 等开发的 T7 启动子驱动系统, Nov agen 的 pET 系统已用于表达成千上万种不同蛋白
控制基础表达水平 pET 系统提供 6 种载体 - 宿主菌组合,能够调节基础表达水平以优化目标基因的表达
没有单一策略或条件适用于所有目标蛋白,所以进行优化选择是必要的
宿主菌株 质粒在非表达宿主菌中构建完成后,通常转化到一个带有 T7 RNA 聚合酶基因的宿主菌( λ DE3 溶原菌)中表达目标蛋白
在 λ DE3 溶原菌中, T7 RNA 聚合酶基因由 lacUV5 启动子控制
未诱导时便有一定程度转录,因此适合于表达其产物对宿主细胞生长无毒害作用的一些基因
而宿主菌带有 pLy sS 和 pLy E 时调控会更严紧
pLy s 质粒编码 T7 溶菌酶,它是 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物,因此可降低其