细胞培养标准操作程序(SOP） 1．目的: 为了保证培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。 2．适用范围： 适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。 3．操作规程： 3。1 培养液、PBS 、胰蛋白酶的配制 3.1.1 1000ml 培养液的配制 1、准备用品：培养粉、1000ml 烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH 仪、2～3 天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCO3 粉、1000ml 无菌玻璃瓶（100ml× 10 个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2～3个过滤器、注射器。紫外线照台 30min . 2、将培养粉用900ml 新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末. 3、充分搅拌，按说明添加成分(如Invitrogen 公司的RPMI—1640 配制1000ml 需加 NaHCO3 粉 2。0g,Invitrogen 公司的DMEM 需加 NaHCO3 粉 3.7g 等），再充分搅拌.无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。 4、用1M(1mol/L）HCl 调PH 至7。0 左右（细胞适宜在PH7 。2~7。4 生长，配制好后PH 值会升高0。2～0。3，故配时调PH 至7。0 左右）。 5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到1000ml . 6、配青霉素 80万/瓶 + 4ml 蒸馏水 溶解 配链霉素 100 万/瓶 + 4ml 蒸馏水 溶解 取0。5ml 青霉素和0.4ml 链霉素加入到1000ml 培养液中，使其终浓度均为100U/ml ，充分搅拌混匀。 7、在无菌操作台里用0.22um 的除菌滤膜过滤配制好的培养液,并分装到到100ml 玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口,盖上橡皮塞,放—20℃保存备用. 注意： (1）配制培养液及调节培养液PH 值所使用的HCl 和（或）NaOH 均需新鲜三蒸水(或新鲜反渗水）配制。 一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。 （2）准备的100ml× 10 个玻璃瓶必须事先高压灭菌！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗 水）的容器均不需高压灭菌,干净即可. 3。1.2 PBS （平衡盐溶液)的配制 NaCl 8g KCl 0。2g ＋新鲜三蒸水（或新鲜反渗水)至1000ml Na2HPO4 ＊H2O 1.56g KH2PO4 0 。2g （1) 无需调PH 值，其成分溶解后PH 为7。4,不需除菌滤膜过滤除菌,放于4℃保存，用前直接高压灭菌（高压时，装PBS 的瓶子的瓶盖要插针头！） （2） Na2HPO4 ＊H2O 1.56g 则 Na2HPO4 ＊12 H2O 需3。4888g （3) 如欲配制500ml ，以上成分减半即可 3.1。3 0.25%胰蛋白酶的配制 胰蛋白酶粉 2。5g EDTA（...
