配胶缓冲液系统对电泳的影响
在 SDS－PAGE 不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是 Tris－HCL 缓冲系统，浓缩胶是 pH6
7，分离胶 pH8
9；而电泳缓冲液使用的 Tris－甘氨酸缓冲系统
在浓缩胶中，其 pH 环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而 CL 离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动
由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带
当样品进入分离胶后，由于胶中 pH 的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离
所以，pH 对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素
样品如何处理
根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS 处理、非还原SDS 处理、带有烷基化作用的还原SDS 处理
1）还原SDS 处理：在上样 bu ffer 中加入 SDS 和 DTT（或 Beta巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成 SDS 与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离
一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样 Bu ffer，离心，沸水煮 5min，再离心加样
2）带有烷基化作用的还原SDS 处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH 基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象
100u l 样品缓冲液中10u l 20％的碘乙酸胺，并在室温保温30min
3）非还原SDS 处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用 1％SDS 沸水中煮 3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破
