正德利用厚生惟和细胞克隆形成实验当单个细胞在体外增殖6 代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有 50 以上的细胞，大小在0.3-1.0mm 之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。 各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。 而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同， 细胞克隆形成率差别也很大：一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强； 二倍体细胞克隆形成率弱， 转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。实验方法：平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验(a)平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。平板克隆形成实验基本步骤：1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在 10%胎牛血清的 DMEM 培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置 37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3 周。3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗 2 次。加 4%多聚甲醛固定细胞5mL固定 15 分钟。然后去固定液，加适量 GIMSA应用染色液染 10～30 分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10 个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率=（克隆数 / 接种细胞数） ×100%平板克隆形成试验方法简单， 适用于贴壁生长的细胞。 适宜底物为玻璃的、 塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好， 不正德利用厚生惟和能有细胞团，接种密度不能过大。平板克隆形成试验方法简单， 适用于贴壁生长的细胞。 适宜底物为玻璃的、 塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好， 不能有细胞团，接种密度不能过大。软琼脂培养克隆形成试验基本步骤...
