结核病实验室诊断技术的综合应用宝安区慢性病防治院实验室黄文焰2019.9.20.12结核病—全球的公共健康问题（2018报告）全球范围内，结核病是导致死亡的十大原因之一，每年有数百万人患上结核病。2017年，HIV阴性人群中，结核病导致约157万人死亡;而且在HIV阳性人群中，也有30万人死于结核。2017年，估计有1000万人新感染结核:中国估计有88.9万人新感染结核。总体而言，90%的结核患者是成年人(≥15岁);9%同时伴随HIV感染(其中有72%是在非洲);三分之二的结核患者来自8个国家:印度(27%)、中国(9%)、印度尼西亚(8%)、菲律宾(6%)、巴基斯坦(5%)、尼日利亚(4%)、孟加拉国(4%)和南非(3%)。全球病例中只有6%出现在欧洲地区(3%)和美洲地区(3%)。3我国结核病概况全球结核病第三高负担国家，结核病疫情表现有“六多”。感染人数多——5.5亿人感染过结核菌，约占全国人口的45％，高于全球平均水平。患病人数多——活动性肺结核、传染性肺结核患病率分别为367/10万和122/10万，新发患者多——全国每年新发活动性肺结核患者145万，其中传染性肺结核患者65万。死亡人数多——全国每年约有13万人死于结核病。农村患者多——全国约有80％的结核病人集中在农村，主要在经济不发达的中西部地区。耐药患者多——全国结核病耐药率高达28％。2030终止结核我们任重而道远！结核病病因•由结核分枝杆菌复合群引起的慢性传染病•结核分枝杆菌（M.tuberculosis）•牛分枝杆菌（M.bovis）•非洲分枝杆菌（M.africanum）•卡内蒂分枝杆菌（M.canetti）•田鼠分枝杆菌（M.nicroti）•菌株是革兰氏阳性菌，很难被染色，有些甚至不能被染色，细胞壁含60%脂质，一般用萋尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法•棒状，无运动能力，专性需氧•生长缓慢•每16-20小时分裂一代，需4-6周才能长成菌落。由于结核分枝杆菌的遗传特性决定其生长周期长，致使常规细菌学检查方法存在着灵敏度低、操作复杂，需时间较长和影响因素较多，不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发展缓慢，无法充分满足临床诊断的需要。456耐多药泛耐药抗原MPT-64细菌学检查•结核病人的细菌学检查不仅是发现传染源的主要途径和手段，也是结核病确诊和制订化疗方案，考核疗效、评价治疗效果的可靠标准。•涂片法抗酸染色荧光染色液基夹层杯•培养法改良罗氏培养液体培养（BD960)7细菌学检查-涂片法抗酸染色荧光染色优点：简便、快速、价廉优点：判读简单快速，集菌与荧光可长期保存染色相结合缺点：敏感性低:5000-10000条菌/ml阳性率可达50%涂阳检出率低于5%，专业机构涂阳缺点：假阳性率较高率可达30%保存时间短，不到4个月痰菌容易假阴性需购置荧光显微镜，增加成本病变是封闭或开放；病变性质和其中能够排出的菌量和排出时间间歇；结核分枝杆菌形态多样性；特异性差：所有分枝杆菌均可着色无法区别死菌与活菌：均为阳性8细菌学检查-培养(固体培养)常用培养基：改良罗氏培养基，370C培养培养周期：56天结果观察：接种后第3第7天各观察一次，以后每周观察一次菌落生长情况，发现有菌生长，立即行抗酸染色，第8周若仍无生长，报告为阴性。菌落形态：典型菌落为干燥、坚硬、表面呈颗粒状，乳酪色或淡黄色，形似菜花样优点：金标准，灵敏度略高于涂片法；可以鉴定死菌与活菌；灵敏度略高于涂片法；可以鉴定死菌与活菌；可进一步进行菌种鉴定和药敏试验可进一步进行菌种鉴定和药敏试验..缺点：诊断周期长，最快也需要6周。有一定的污染率需人工肉眼观察，工作强度大910细菌学检查-培养(液体培养)自动化液体培养代表机型：MGITBD960全自动培养及药敏系统BacTALERT3D培养系统优点：可自动孵育，自动检测，自动报告阳性或阴性结果MGIT系统平均报阳时间4-11天液体培养与罗固体培养的优势敏感性：提高10%阳性检出率可进行后续的菌型鉴定和药敏实验报告进间：培养10天VS28-42天药敏11天VS28gd结核病治疗：指南第四版，世界卫生组织201011其他检测方法免疫学方法、分子生物学方法，质谱技术等免疫学检测方法免疫层析法结核抗体检测结核菌素皮肤试验（TST）γ-干扰素释放试验（IGRAs）分子生物学方法第一类：结核分枝杆菌特异性的分子检测实时荧光定量PCR检测DNA：IS6110、HSP...
