微专题突破无菌操作技术实践一、微生物的分离与鉴定微生物的分离方法有很多种，本专题中常用的是：平板划线法、涂抹平板法、微生物的选择培养等。针对不同微生物的特点选择不同的方法，对目的微生物进行筛选。以下是尿素分解菌和纤维素分解菌的分离与鉴定比较。项目分离选择条件鉴定方法尿素分解菌的分离与鉴定利用尿素为唯一氮源纤维素分解菌的分离与鉴定利用纤维素为唯一碳源在以纤维素为唯一碳源的培养基培养基中加入酚红指示剂，变红色上，利用刚果红染色法，出现透明圈细菌等微生物合成脲酶，将尿素分解产生 NH3，使 pH 升高，加入酚红变红色分解纤维素的微生物产生纤维素酶，将纤维素分解为纤维二糖或葡萄糖，使纤维素—刚果红复合物降解而出现透明圈土壤取样→制备培养基→选择培养→富集培养→梯度稀释→涂布培养→刚果红染色法→挑取菌落→进一步鉴定鉴定原理土壤取样→制备培养基→样品梯度步骤稀释→涂布平板→培养观察→进一步鉴定二、纯化细菌的方法1．倒平板与涂布平板法的操作(1)倒平板操作(2)涂布平板操作12．两种纯化细菌的方法比较项目平板划线法稀释涂布平板法优点可以观察菌落特征，对混合菌进行分离缺点不能计数适用范围适用于好氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少，较麻烦，平板不干燥，效果不好，容易蔓延三、影响植物组织培养过程的几种主要因素1．培养材料不同的植物组织，培养的难易程度差别很大，容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养。同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短对培养也有影响。幼龄、保存时间短的植物材料容易培养成功。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。2．无菌条件培养基上有细菌等微生物存在时，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此在培养过程中要求进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。3．植物激素在配制好的 MS 培养基中，常常需要添加植物激素。其中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等，都会影响实验结果。21．在进行分离分解尿素的细菌的实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150 个菌落，而其他同学只筛选出大约 50 个菌落。某同学的实验结果产生的原因可能有()①土样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照A．①②③C．①②④B．②③④D．①③④【解析】某同学从培养基...
