Gateway™ 技术提供以下可能: 通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间 将您的基因转入到多个表达系统 在任何您选择的系统――体外,细菌,酵母,昆虫,或哺乳动物――分析表达 一种更好的克隆方法 Gateway™技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统(图1)
这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤,而同时典型的克隆效率高达95%或更高
当基因在目的表达载体之间快速简便的穿梭时,还可以保证正确的方向和阅读框
Gateway™也有助于进行带不同数目纯化和检测标签的表达
Gateway™利用了位点特异重组,所以在构建入门载体后,不再需要使用限制性内切酶和连接酶
一旦您拥有了一个入门克隆,就可以多次使用它,转移您感兴趣的基因到Gateway™改造过的 的各种表达载体(目的载体)
此外,由于在重组时D N A 片段的阅读框和方向保持不变,因而您不必再为新的表达克隆的测序担心
在使用每一种新的表达系统时,将会节省您更多的时间
图1-Gateway™技术的灵活性 *目的基因克隆进入门载体后, 可以同时转移目的基因到多个目的载体
一种强大而可靠的技术 Gateway™技术是克隆和亚克隆DNA 序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达
一旦进入这个多功能的操作系统,DNA 片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移
Gateway™技术是基于已研究的非常清楚的λ 嗜菌体位点特异重组系统(attB x attP → attL x attR)
BP 和 LR 两个反应就构成了 Gateway™技术(表 1 和图2)
BP 反应利用一个attB DNA 片段或表达克隆和一个attP 供体载体之间的重组反应,创建一个入门克隆
LR 反应是一个attL 入门克隆和一个attR 目的载体之间的重组反应
LR 反应用来在在平行的反应中转移目的序