分子生物学实验常用工具酶总结

精品文档---下载后可任意编辑工具酶 基因工程：在人工可以控制条件下，将基因剪切或重新组合，再导入另一生物体内，使这些基因在其中表达并遗传下去的一门技术。 核心：对基因进行人工切割、连接和重新组合，构建重组 DNA。工具酶：在基因工程的重组 DNA 过程中，所需要用到的酶的统称。一、限制性内切酶（restriction endonuclease）主要功能：对外源性的双链 DNA 进行切割、水解，不允许外源性 DNA 存在于细菌自身细胞内。 （这种酶能对在自身细胞内存在的 DNA 种类给予限制——限制性内切酶）限制-修饰系统：合成限制性内切酶的细胞，其自身的 DNA 不受酶的切割，这是因为细菌细胞还会合成一种修饰酶，可以对自身 DNA 进行修饰，即改变 DNA 原来具有的可以被限制性内切酶识别的核酸顺序结构，从而不被限制性内切酶识别及切割、水解。 保护自身遗传物质稳定的机制。限制性内切酶：从原核生物中发现的，约 600 种，可识别 108 种不同的特定 DNA 顺序。以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键，产生 DNA 片段的 5’端为 P，3’端为-OH。命名：获得该酶的细菌属名的第一个字母（大写）+该菌种名的前两个字母(小写)+株系的字母（小写）或数字+罗马数字（同一株菌种不同内切酶的编号）例：细菌属名细菌种名菌株名称限制酶名称ArthrobacterluteusAlu** Expressionis faulty **EscherichiacoliRY13EcoR **Expression is faulty**BacillusamyloliquefaciensHHamH **Expression is faulty**HaemophilusinfluenzaeRdHind ** Expressionis faulty ** （一）三种常用内切酶1.I型限制性内切酶 同时兼有切割 DNA 的功能和修饰酶的修饰功能。 在酶的识别位点上，若 DNA 两条链菌没有发生甲基化，则行使内切酶的功能，对 DNA 进行切割，同时转变成 ATP 酶。若 DNA 双链中有一条链已发生甲基化，则此类酶显示修饰酶的作用，对另一条 DNA 进行甲基化修饰，然后在行切割功能。 （实际上，有内切酶、修饰酶、ATP 酶及解旋酶四种功能）I型限制性内切酶在 DNA 链上的识别位点和切割位点不一致，也不固定。没有时间应用价值。【DNA 甲基化：DNA 化学修饰的一种形式，能在不改变 DNA 序列的前提下，改变遗传表现（外遗传机制）。 多发生于 CpG 二核苷序列上（在甲基转移酶的催化下，DNA 的 CG 两个核苷酸中的胞嘧啶被选择性添加甲基，形成 5-甲基胞嘧啶）。 甲基化位点可随 DNA 的复制而遗传（...