精品文档---下载后可任意编辑工具酶 基因工程:在人工可以控制条件下,将基因剪切或重新组合,再导入另一生物体内,使这些基因在其中表达并遗传下去的一门技术。 核心:对基因进行人工切割、连接和重新组合,构建重组 DNA。工具酶:在基因工程的重组 DNA 过程中,所需要用到的酶的统称。一、限制性内切酶(restriction endonuclease)主要功能:对外源性的双链 DNA 进行切割、水解,不允许外源性 DNA 存在于细菌自身细胞内。 (这种酶能对在自身细胞内存在的 DNA 种类给予限制——限制性内切酶)限制-修饰系统:合成限制性内切酶的细胞,其自身的 DNA 不受酶的切割,这是因为细菌细胞还会合成一种修饰酶,可以对自身 DNA 进行修饰,即改变 DNA 原来具有的可以被限制性内切酶识别的核酸顺序结构,从而不被限制性内切酶识别及切割、水解。 保护自身遗传物质稳定的机制。限制性内切酶:从原核生物中发现的,约 600 种,可识别 108 种不同的特定 DNA 顺序。以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键,产生 DNA 片段的 5’端为 P,3’端为-OH。命名:获得该酶的细菌属名的第一个字母(大写)+该菌种名的前两个字母(小写)+株系的字母(小写)或数字+罗马数字(同一株菌种不同内切酶的编号)例:细菌属名细菌种名菌株名称限制酶名称ArthrobacterluteusAlu** Expressionis faulty **EscherichiacoliRY13EcoR **Expression is faulty**BacillusamyloliquefaciensHHamH **Expression is faulty**HaemophilusinfluenzaeRdHind ** Expressionis faulty ** (一)三种常用内切酶1.I型限制性内切酶 同时兼有切割 DNA 的功能和修饰酶的修饰功能。 在酶的识别位点上,若 DNA 两条链菌没有发生甲基化,则行使内切酶的功能,对 DNA 进行切割,同时转变成 ATP 酶。若 DNA 双链中有一条链已发生甲基化,则此类酶显示修饰酶的作用,对另一条 DNA 进行甲基化修饰,然后在行切割功能。 (实际上,有内切酶、修饰酶、ATP 酶及解旋酶四种功能)I型限制性内切酶在 DNA 链上的识别位点和切割位点不一致,也不固定。没有时间应用价值。【DNA 甲基化:DNA 化学修饰的一种形式,能在不改变 DNA 序列的前提下,改变遗传表现(外遗传机制)。 多发生于 CpG 二核苷序列上(在甲基转移酶的催化下,DNA 的 CG 两个核苷酸中的胞嘧啶被选择性添加甲基,形成 5-甲基胞嘧啶)。 甲基化位点可随 DNA 的复制而遗传(...