第三十五章 DNA 的重组 第一节 同源重组 一、Ho lliday 模型 二、细菌的基因转移与重组 致育因子（F 因子）通过结合作用由F+细胞向F-细胞转移，F 质粒约1/3 的基因与转移有关，traS 和traT 基因编码表面排斥蛋白，阻止F+细胞之间的转移，F+细胞的性菌毛与F-细胞结合后收缩，使二者靠近，TraD 蛋白构成转移的通道，在TraI 在TraY 的帮助下结合到转移起点oriT 上，切开一条链，使其5´端进入受体细胞，并合成其互补链，使F-细胞转化为F+细胞，给体细胞中的单链也可以合成互补链。 在细菌基因转移的不同时间将配对细胞分开，可以确定基因在染色体上的位置。F 质粒DNA 可以通过重组整合到受体的染色体中，使受体菌成为高频重组（Hrf）菌株，若F 质粒的DNA 未能完整地进入受体菌，则受体菌不能转化为F+，F 质粒的DNA 可以被切割出来，有时可携带宿主菌的染色体DNA，称作F´因子，F´因子携带的基因可在受体菌表达。 外源基因可以进入感受态细菌，称作转化，自然条件下感受态的形成需要10 多种蛋白质参与，实验室常用高浓度的Ca2+处理使细菌形成感受态。 通过噬菌体将细菌基因从供体菌转移到受体菌称作转导，若宿主菌任意部位的基因取代噬菌体DNA的一部分转入受体菌，称作普遍性转导，若宿主整合部位的DNA 取代了噬菌体的部分DNA 称作限制性转导。进入受体菌的基因可与染色体重组。 用溶菌酶除去细菌的细胞壁，人工促使原生质体融合，可引起广泛的重组。 大肠杆菌染色体的基因图 噬菌体的基因重组 三、重组有关的酶 依赖RecBCD 起始的重组模型： RecBCD 有依赖ATP 的核酸外切酶、核酸内切酶和解螺旋酶活性，当DNA 断裂时，它结合在其游离端，使其解旋并降解，直至酶移动到chi 位点（GCTGGTGG），在其3＇侧4-6 核苷酸处将链切断，产生3＇游离单链，随后单链与RecA 结合，开始同源区重组。 RecA 蛋白的丝状聚合体与DNA 的相互作用 RecA 蛋白的带状图解 RecA 蛋白的丝状聚合体，每一圈螺旋由6 个RecA 蛋白单体构成，其中一个单体由红色标出。 RecA 蛋白引起DNA 同源重组的模型 在大肠杆菌中由Ru v A，Ru v B 和Ru v C 蛋白参与的同源重组。 （a）Ru v A 四聚体的图解。四个亚基形成的结构像四个花瓣的花。 （b）Ru v A/Ru v B 的作用： （左）Ru v A 四聚体结合到Ho lliday 位点； （中）Ru v B 六聚体结合到杂合双螺旋的两对面，DNA 穿过其中心， Ru v B 六聚体...
