抗乙酰胆碱受体单链抗体酵母表达的特性鉴定

抗乙酰胆碱受体单链抗体酵母表达的特性鉴定【摘要】 ［目的］探讨毕赤酵母GS115 表达的重症肌无力单链抗体 A7 的一般特性及与大鼠肋间肌乙酰胆碱受体的结合特异性［方法］采纳 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹试验，检测已经转化至毕赤酵母 GS115 中的重症肌无力重组载体pPIC9K ScFv A7表达的单链抗体 A7 蛋白的分子质量；应用间接免疫荧光技术确定表达蛋白与大鼠肋间肌乙酰胆碱受体的亲和性［结果］毕赤酵母 GS115 培育上清液中有目的蛋白的表达，分子质量约为 44ku；间接免疫荧光试验显示，在大鼠肋间肌细胞间有荧光出现［结论］单链抗体 A7 可以在毕赤酵母中成功地表达，并且可与大鼠肋间肌乙酰胆碱受体结合.【关键词】 单链抗体 受体 胆碱能 重症肌无力 ABSTRACT:OBJECTIVETo determine the specificity of expressed single chain variable fragment (ScFv) A7 of antibody against acetylcholine receptor (AChR) in myasthenia gravis in Pichia pastorisMETHODSThe molecular weight of expressed protein (ScFvA7) was analyzed by sodium dodecyl sulfate olyacrylamide gel electrophoresis (SDS AGE) and Western blotting. The affinity of expressed protein to AChR in mouse intercostals muscles was detected using indirect immunofluorescence technologyRESULTSThe target protein was secreted in the supernatant of expression culture medium. Its molecular weight was about 44ku. There was fluorescence between the mouse intercostals muscle cellsCONCLUSIONThe target protein has been expressed from Pichia pastoris GS115 successfully and it can bind to the AChR in mouse intercostals muscles. Key words:single chain variable fragment;receptor, cholinergic;myasthenia gravis 重症肌无力是抗乙酰胆碱受体抗体介导的自身免疫性疾病，目前对它的治疗主要以非特异性免疫治疗为主，此方法虽然可以在一定程度上减轻患者的临床症状，降低死亡率，但可引起广泛的免疫抑制等严重的副作用.特异性免疫治疗还处于动物实验阶段，包括口服或经鼻黏膜给予乙酰胆碱受体诱导免疫耐受，导入融合 FasL 基因的抗原提呈细胞以杀伤反应性 T 细胞，而 T 细胞...