江苏省盐城中学高中生物 第二节 基因工程的基本操作程序复习资料 苏教版必修 32．获取目的基因的方法 (1)从基因文库中获取目的基因① 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段，导人受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因组文库：含有一种生物的全部基因② 种类cDNA 文库 ：含有一种生物的 部分基因③ 目的基因的获取根据基因的有关信息：基因的核苷酸序列、基因 在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA 、基因的翻译产物蛋白质 等特性获取目的基因。(2)利用 PCR 技术扩增目的基因 。①PCR：是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术，全称是聚合酶链式反应。② 条件：已知目的基因的核苷酸序列。③ 过程：第一步：加热至 90 ～ 95℃DNA 解链 ；第二步：冷却到 55 ～ 60℃ ，引物结合到互补 DNA 链；第三步：加热至 70 ～ 75℃ ，热稳定 DNA 聚合酶从引物起始互补链的合成。④ 方式：指数扩增=2n(n 为扩增循环的次数)(3)人工合成法：基因较小，核苷酸序列已知，可以人工合成。第二步：基因表达载体的构建（最核心步骤）1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基因的首端，是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出 mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的 DNA 片段 ，位于基因的尾端。（3）标记基因：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。（4）不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。第三步：将目的基因导入受体细胞_1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法：(1)将目的基因导入植物细胞：a.农杆菌转化法① 农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染力；当植物受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中 Ti 质粒的 T-DNA 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。② 转化：目的基因插人 Ti 质粒的 T-DNA农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗...
