镍柱蛋白纯化

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2025-08-19 发布于天津市
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一、原理镣柱里面含有琼脂糖微球体，在琼脂糖鳌合介质的作用下微球体与N0+发生螯合，螯合后的 NI2+能与 HIS 上的咪醴环发生特别的相互作用，从而实现蛋白质的分离。影响蛋白质/多肽与金属离子螯合力大小的因素主要是蛋白质表面可结合的氨基酸（种类、数目和分布）、金属离子的种类和密度、层析条件（PH、盐的种类和浓度、添加剂等）二、缓冲液的配制（5ml PH = 7.4）50mlElution buffer: PBf Nacl 14.625g1 mM9g2mM18g4mM 咪醴 45gBOOmM 咪醴 63g三、操作步骤此步骤过镰柱的所有溶液、上清蛋白都要先用滤膜过滤，所有液体过镰柱的速度要严格控制 2.5ml/min,中间镣柱不能进气泡Binding buffer: PBr 50ml

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