I Ｐ T Ｇ诱导蛋白表达得原理及方法步骤E、c ｏ li 得乳糖操纵子（元)含 Z、Y 及Ａ三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶与乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列 O、一个启动序列 P 及一个调节基因 I。I 基因编码一种阻遏蛋白,后者与 O 序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态。在启动序列 P 上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(ＣＡ P）结合位点。由 P 序列、Ｏ序列与Ｃ A Ｐ结合位点共同构成ｌａ c 操纵子得调控区,三个酶得编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物得协调表达 。在没有乳糖存在时,lac 操纵子(元)处于阻遏状态。此时,I 序列在 PI 启动序列操纵下表达得Ｌ a ｃ阻遏蛋白与Ｏ序列结合，阻碍 RNA 聚合酶与 P 序列结合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,l ａ c 操纵子（元)即可被诱导。在这个操纵子(元）体系中,真正得诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经ｂ－半乳糖苷酶催化,转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与Ｏ序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷(IPT Ｇ）就是一种作用极强得诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。材料1、诱导表达材料( 1 ) LB (Lur ｉ a—Bert ａ ni)）培育基酵母膏 （Yeast ｅ xtra ｃ t) ５ g 蛋白胨 (Ｐｅ ptone） 1 ０ gNa Ｃ l 10g 琼脂 (A ｇａｒ) １－2%蒸馏水 (Ｄ i ｓｔ ille ｄ w ａ ter) 10 ０ 0ml pH ７、0适用范围:大肠杆菌( 2 ) IPTG 贮备液:2 g ＩＰ T Ｇ溶于 1 ０ mL 蒸馏水中，０ 、 2 ２ μm 滤膜过滤除菌，分装成 1 ｍ L ／份,－2 ０ ℃ 保存。( 3 ) ｌ× 凝胶电泳加样缓冲液:50 mmo ｌ / L Tr ｉ s -CI ( p Ｈ 6 、 8 )50 m ｍ ol ／ L D Ｔ T２ ％ S Ｄ S (电泳级)0、１ % 溴酚蓝１ 0 ％ 甘油2、大肠杆菌包涵体得分离与蛋白纯化材料１ )酶溶法(１)裂解缓冲液：50 mm ｏｌ / L T ｒ is-C Ｉ （ p Ｈ 8 、 0 )１ mmol / Ｌ ＥＤ TA１０ 0 mm ｏ l / LNaCI(2)50 m ｍ ol / Ｌ 苯甲基磺酰氟(Ｐ MSF ）。（3)１ 0 mg / ｍＬ 溶菌酶。(４)脱氧胆酸。(5)1 mg ／ mL D Ｎ as ｅ Ｉ。２ ）超声破裂法（ 1 ） T Ｅ 缓冲液。（ 2 ) 2×SDS -PAGE 凝胶电泳加样缓冲液:１ 00 m ｍ o ｌ / L Tris-Ｈ CI ...
