按原理分类纸色层:滤纸吸附的水作固定相,有机溶剂作流动相。薄层色谱:把吸附剂粉末铺成薄层作为固定相。平板色谱法平板色谱包括纸色谱和薄层色谱(纸层析和薄层层析)。与其它色谱方法不同,平板色谱法中一般不使用动力源第一节薄层色谱法1分离过程,原理,特点2.比移值Rf3.吸附剂(固定相)和展开剂(流动相)4.操作技术5.应用[原理]:当展开剂从薄板上固定相的空隙中通过时,由于各组分的K的不同和足够多次的分配.[分离过程]平板色谱流动相的移动是依靠毛细作用。将试样点在色谱滤纸或层析板的一端,并将该端浸在作为流动相的溶剂(常称之为展开剂)中,随着溶剂向上的移动,经过试样点时,带动试样向上运动。1.分离过程,原理,特点装置斑点1.层析缸2.滤纸3.原点4.展开剂5.前沿6.7.斑点12345673[缺点]:Rf值的重复性差分离效率较低,不适用挥发性试样分离。定性定量不便。[克服办法]:标样和试样在同一块板上展开•同一张色谱图可用不同的试剂显斑,也可用浓硫酸等强氧化剂或在400~500oC加热碳化检出[特点]:•装置简、操作方便•展开时间短•可在一块层析板上同时展开多个试样及将多条滤纸同时展开•试样一般不需要经过预处理即可分离•样品负荷量大、斑点扩散少xyRf的计算2.比移值Rf组份分离后,它们在滤纸上的位置用比移值Rf表示.[定义]:Rf的大小取决于溶质在二相间的分配系数及滤纸的性质.不同的组分具有不同的分配系数,因而也就有不同的Rf.这就是定性的依据.(1).欲分离物的本性:物质在两相的分配系数,决定了它的Rf大小;影响Rf的因素(2).层析溶剂:同一组分在不同溶剂中Rf不同。通常应选这样的层析剂,使溶质Rf适宜范围0.2-0.8,最佳范围0.3-0.5。不同组分的Rf差值>0.05.(3).pH:影响它们的存在状态(4).滤纸:质地均一、厚薄适当、具有一定机械强度、不含杂质(5).温度:在层析缸中用红外灯照射。温度会影响溶质的分配系数及流动相的扩散速度。层析操作应在恒温下进行,温度不超过±0.5oC(6).展开方式:展开方式不同,Rf也不同。下行法的Rf最大,上行法的Rf较小,环行法的Rf也不大。吸附剂决定吸附性能的因素:吸附剂的化学组成、活性、表面积[要求]:•合适的吸附力•与展开剂、被吸附物质均不起化学反应•粒度细小而且均匀(范氏方程,减少涡流扩散项)3.吸附剂(固定相)和展开剂(流动相)(1).氧化铝氧化铝呈微弱碱性,酸性较强的化合物在氧化铝上吸附的很牢(所以,酸性物质分离不好),故通常用于分离碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物质。一般要求薄板用的活性为Ⅱ~Ⅲ级氧化铝的活性与含水量密切相关(含一定量的水份时,吸附剂表面的吸附中心回被水分子占据)活性ⅠⅡⅢⅣⅤ含水量(%)0361015故加热驱除水-活化;加入一定量的水-失活Δ100~150oC,除去Al2O3中与羟基结合的部分水份,使Al2O3有一定的活性Δ150~300oC,Al2O3活性达Ⅱ~Ⅲ级Δ300~400oC,Al2O3活性达Ⅰ~Ⅱ级Δ>600oC,Al2O3进一步脱水并开始烧结?由于脱水过程受到许多因素的影响,因此,每批生产的Al2O3,其表面积和表面孔穴结构并不一致,活性也不相同。?Al2O3活性的测定:取20µL染料溶液(偶氮苯30mg、对-甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、和对氨基偶氮苯各20mg,溶解于50mLCCl4中),加到薄板上,用CCl4展层,根据下表确定活性。活性ⅡⅢⅣⅤRf,偶氮苯0.590.740.850.95Rf,对-甲氧基偶氮苯0.160.490.690.89Rf,苏丹黄0.010.250.570.78Rf,苏丹红0.000.100.330.56Rf,偶氮苯0.000.030.080.19市售的供薄层色谱用的Al2O3有:Al2O3-H氧化铝中无粘合剂Al2O3-G氧化铝中含煅石膏(一般5%煅石膏)[煅石膏CaSO4,作为粘合剂]Al2O3-HF254氧化铝中不含煅石膏,仅含荧光指示剂(在254nm下呈黄绿色荧光)Al2O3-GF254氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂(在254nm下呈黄绿色荧光)上述商品可以直接调料涂敷(1份料,2份水调合)(2).硅胶(吸附性较Al2O3弱)硅胶是微酸性吸附剂,且适用于酸性、中性物质的分离(如有机酸、氨基酸、萜类、甾体)碱性物质则能与硅胶作用(当用中性溶剂展层,碱性物质有时停留在原点不动,或者得到拖尾的斑点,而不能很好的分离)活性ⅠⅡⅢⅣ...