实验八叶绿体中色素的提取和分离教学目的1.初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法
2.探索叶绿体中有几种色素
实验原理1.叶绿体中的色素能溶解在丙酮(有机溶剂,酒精、汽油、苯、石油醚等)中,所以用丙酮可提取叶绿体中色素
2.色素在层析液中溶解度不同,溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快,溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢,因而可用层析液将不同的色素分离
实验程序(1)称取5g绿色叶片并剪碎提取色素研钵→研磨→漏斗过滤→(2)加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口(1)将干燥的滤纸剪成6cm长,1cm宽的纸条,剪去一端两角(使层析液同时到达滤液细线)制滤纸条(2)在距剪角一端1cm处用铅笔画线(1)用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线滤液划线(2)干燥后重复划2-3次(1)向烧杯中倒入3ml层析液(以层析液不没及滤液细线为准)纸上层析(2)将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁,轻轻插入层析液中(3)用培养皿盖盖上烧杯观察结果:滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带(如下图)最宽:叶绿素a;最窄:叶绿素b;相邻色素带最近:叶绿素a和叶绿素b;相邻色素带最远:胡萝卜素和叶黄素
实验关键1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片
如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等
2.画滤液细线时,应以细、直、颜色浓绿为标准,重复画线时必须等上次画线干燥衙再进行,重复2-3次
3.层析时不要让滤液细线触及层析液
注意事项1.因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂,所以研磨要快,收集的滤液要用棉塞塞住,层析时要加盖,尽量减少有机溶剂的挥发
2.在研磨时要加少许二氧化硅,目的是为了研磨充分,有利于色素的提取;加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中,叶绿体中的色素受到破坏
3.分离色素时,一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液,这是因为色素易