核酸凝胶染色剂GelRed

精品文档---下载后可任意编辑水溶性包装产品通过美国环保标准的安全测试，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成环境污染。GelRedTM 和 GelGreenTM 是由美国 BIOTIUM 公司开发的两种集高灵敏度、低毒性和超稳定性于一身的，极佳的核酸凝胶荧光染色试剂。目前，大多数商业化的核酸凝胶染色试剂总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不能完全令人满意。例如，EB 作为使用最广泛的核酸凝胶染色试剂，能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度，但它是一种高诱变性的化学物质，且染色后背景荧光信号较高（图 1）。SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，稳定性差导致染色效果极不可靠。SYBRsafe 被认为是市场上较为安全的核酸染料，但它的染色效果还远不及 SYBR Green I，且毒性依旧较高(图 3）。GelRed 和 GelGreen 无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色，都表现出了极高的灵敏度。为配合 312nm-UV 凝胶成像系统而设计的 GelRed，在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后（该试验步骤中使用稀释的 NaCl 溶液替代传统的 TBE 缓冲溶液），在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold。但与 SYBR Gold 不同，GelRed 在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度。我们新开发的 GelGreen 可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的讨论人员的使用要求。GelGreen 无论是在预制凝胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当，但不存在后者的稳定性问题。实际上，GelRed 和 GelGreen ，特别是 GelRed 非常稳定，可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热，便于采纳常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备，长期保存。同样重要的是，GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green μg/mL(该浓度远高于推举用于电泳后染色的 约 4μg/mL 的 3X 染色液)浓度下， GelGreen 没有诱变性，而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。GelRed 和 GelGreen 的特别化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞，正是这一特性降低了染料的细胞毒性。见图 3。相反，SYBRGreen I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色，这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYB...