四川省岳池县第一中学 2014-2015 学年高中生物 专题 5 课题 3 第 2课时 多聚酶链式反应扩增 DNA 片段课前预习学案 新人教版选修 1使用说明与学法指导1.回顾上节课凝胶色谱法和电泳的原理。2.掌握凝胶色谱法分离蛋白质的操作以及电泳操作过程。知识准备 凝胶色谱法和电泳的原理教材助读1、 蛋白质的提取和分离蛋白质的提取分离一般分为四步： 、 、 、 。 2、 样品处理（1）红细胞的洗涤：洗涤的目的是： ，采集的血样药及时采用 分离红细胞，然后用胶头吸管吸上层透明的 ，将下层暗红色的 倒入烧杯中，再加入 ，缓慢搅拌 ，低速短时间离心，如此重复洗涤三次直到 ，表面红细胞已洗干净。（2）血红蛋白的释放：在 和 的作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白（3）分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的液体分 4 层，第 1 层为无色透明的 ，第 2 层为白色薄层固体是 ，第 3 层为红色透明液体这是 ，第 4 层为其他杂质的暗红色沉淀。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。（4）透析：取 1ml 血红蛋白溶液装入 中，将透析袋放入盛有 300ml 20mmol/L的 中，透析 12h。透析可以去除样品中的 杂质或用于更换样品的 3、凝胶色谱操作首先要制作 ；第二步是 ，因为 ，所以装柱前要根据色谱柱的体积计算所需要的凝胶量。在填充凝胶柱时，不得有 存在，避免降低分离效果；第三步是 。（一） 血液的组成成分 水分 血浆 无机盐、葡萄糖等血液 白细胞 血细胞 血小板 两个 α-肽链 红细胞 血红蛋白 两个 β-肽链 最多 四个亚铁红素基团（二）实验操作1.样品处理：通过洗涤红细胞、血红蛋白释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液。试管中溶液层次：1第 1 层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第 2 层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第 3 层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；第 4 层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。2.样品的粗分离方法：透析 原理：透析袋能使小分子自由进出，而大分子保留在袋内目的：除去样品中分子量较小的杂质。3.样品的纯化：通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去（1）凝胶色谱柱的制作：①、取长 40 厘米，内径 1.6 厘米的玻璃管，两端需用砂...
