江苏省2013年栟茶中学高三生物考前赢分30天 第30天

2013 年江苏栟茶中学高三生物考前赢分 30 天 第 30 天1、DNA 的粗提取与鉴定（1）．思路：利用 DNA 与 RNA、蛋白质等 在物理和化学性质方面的差异，提取 DNA，去除其他成分。（2）．原理利用 DNA 的溶解性 ①DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度 NaCl 中溶解度不同，盐浓度为 0.14mol/l 时，DNA溶解度最小。 ②DNA 不溶于酒精溶液，某些蛋白质则溶于酒精。利用 DNA 的耐受性 ① 蛋白酶水解：蛋白酶能水解蛋白质，但是对 DNA 没有影响。 ② 高温变性：大多数蛋白质不能忍受 60℃—80℃的高温，而 DNA 在 80℃以上才会变性。 ③ 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对 DNA 没有影响。（3）．实验设计① 材料的选取：选用 DNA 相对较高的生物组织。② 细胞的破碎（以鸡血为例） 鸡血细胞 用玻璃棒搅拌 收集滤液。③ 杂质的去除：方案之一是利用 DNA 在不同浓度的 NaCl 中溶解度的不同，通过控制 NaCl溶液的浓度去除杂质。④DNA 的析出：处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、95%冷却的酒精溶液可使 DNA析出。*动物材料 ：加水-过滤-加 NaCl-加水-过滤-加 NaCl-过滤-加酒精-搅拌析出（轻缓，以免DNA 分子断裂）*植物材料：碎——磨（加洗涤剂和食盐）——滤（纱布，滤去杂质）——析（加冷酒精）（4）．提纯方法① 盐浓度为 0.14mol/l，DNA 析出② 木瓜蛋白酶处理，去除蛋白质杂质过滤加蒸馏水③60-75℃保温 10-15min④95%的冷酒精：蛋白质溶解，DNA 不溶⑤ 过滤、离心等（5）．DNA 的鉴定 DNA 溶解在 2 mol/l 的 NaCl 溶液中 + 二苯胺试剂 溶液颜色变蓝。对照组不加丝状物，其他与实验组相同1、分离蛋白质的常用方法和原理（1）凝胶色谱法① 概念：凝胶色谱法也称作分配色谱法 ，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。② 原理：大多数凝胶是由多糖类化合物 构成的，如葡聚糖 或琼脂糖 。其内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长 ，移动速度较慢 ；而相对分子质量较大 的蛋白质无法进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程较短 ，移动速度较快 。相对分子质量 不同的蛋白质因此得以分离。（2）缓冲液① 作用：在一 定范围内，缓冲溶液能抵制外界的酸和碱 对溶液 PH 的影响，维持 PH 值基本不变。② 配置：通常由 1—2 种缓冲剂溶解于水中配置而成。调节缓冲剂的使用...