抗 HBsAg 人源抗体 Fab 片段原核表达的优化【摘要】 目的: 优化抗 HBsAg 人源抗体片段 hFabHB1 在大肠杆菌中功能性表达的条件。方法: 通过测定宿主菌培育物 A600 值观察 10 g/L 的葡萄糖对宿主菌生长的影响; 比较诱导前是否更换培育液的 2种不同条件 hFabHB1 的表达产量; 比较在37℃和 25℃ 2 种诱导温度下功能性hFabHB1 分子的表达量以及 Fd 和轻链表达的平衡性。大量表达的功能性 hFabHB1 分子经亲和层析纯化后, 用 ELISA 鉴定其生物活性。结果: 在培育液中加入 10 g/L 的葡萄糖可有效抑制重组蛋白的本底表达, 增加宿主菌的生长速度; 在加入 IPTG 诱导前更换培育液可明显提高 hFabHB1 的表达产量; 25℃的诱导温度比 37℃能表达 抗HBsAg 人源抗体 hFabHB1 原核表达 优化 乙型病毒性肝炎是一类严重危害人体健康的感染性疾病, 全球约有亿人感染乙肝病毒, 其中近 10%的患者可因持续感染导致肝硬化或肝细胞癌[1]。针对 HBsAg 的中和抗体可阻断乙肝病毒对肝细胞的吸附, 从而避开了病毒攻击。目前 HBsAg 的中和抗体作为免疫治疗剂已在临床上广泛使用, 如对 HBsAg 阳性产妇生产的新生儿进行抗体的被动免疫, 以阻断母婴垂直传播; 对肝移植的乙肝患者进行抗体的紧急接种来保护移植肝组织免受病毒感染等。但目前使用的抗体均来自人血清, 价格贵, 来源有限, 且存在其他病原体感染的潜在威胁。hFabHB1 是通过基因工程技术, 从 HBV 免疫型噬菌体抗体文库中筛选的全人源 Fab 型抗体片段分子, 其靶分子是 HBV HBsAg, 实验证实 hFabHB1 可有效阻止 HBV 与人原代肝细胞的结合, 是一个具有潜在临床应用价值的候选分子。但 hFabHB1 在原核表达系统中存在问题, 主要表现在, 组成 Fab 分子的重链 Fd 段和轻链大多只能以包涵体形式表达, 形成有功能的 Fab 异二聚体分子较少, 并且 Fd 和轻链表达量失衡, 轻链大于 Fd。本讨论对影响 hFabHB1 功能性表达的各类因素进行优化, 如抑制宿主细菌的本底表达、 在诱导前更换培育液、 降低诱导温度等, 使其最终表达产量达到 20 mg/L。 1 材料和方法 材料 重组质粒 pComb3x hFabHB1为从噬菌体抗体库中筛出的、 能特异性与HBsAg 结合的抗体克隆; 大肠杆菌表达菌株Top10F′购自 Invitrogen 公司; Protein L 柱填料购自 Pierce 公司, HRP 标记的山羊抗人 IgG 抗体购自 Sigma 公司; HBsAg 由深圳...
