高考生物必记知识点 新人教版1.作为载体的条件① 能在宿主细胞中稳定保存并大量复制。② 有一个至多个限制性核酸内切酶切割位点，以便与外源基因连接。③ 具有特殊的标记基因，便于筛选2.载体的作用① 作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内；② 利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 3.DNA 连接酶起作用时不需要模板。4.限制酶在使用时的注意事项：① 切割目的基因和载体时，最好用同一种限制酶，以产生相同的黏性末端。② 在切割含目的基因的 DNA 分子时，需用限制酶切割两次此 DNA 分子，产生 4 个末端。只有这样，目的基因两端都有可连接的黏性末端或平末端。③ 限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。 5.未知序列的目的基因是无法从基因文库中获取的。6.PCR 技术扩增目的基因的过程：加热至 90～95℃DNA 解旋→冷却到 55～60℃，引物结合到互补 DNA 链→加热至 70～75℃，热稳定 DNA 聚合酶从引物起始互补链的合成。7.基因表达载体的构建(1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。(2)组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因。基因工程中构建基因表达载体需要限制酶来切割以获取目的基因，同时需要相同的限制酶切割载体以获取与目的基因相同的黏性末端或平末端，再通过 DNA 连接酶连接目的基因和载体。8.将目的基因导入受体细胞 植物细胞——农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法动物细胞——显微注射技术微生物细胞——Ca2＋处理法9.目的基因的检测和表达 分子水平检测：①目的基因是否进入受体细胞——DNA 分子杂交(DNA 和 DNA 之间)② 目的基因是否转录出信使 RNA——分子杂交技术(DNA 和 RNA 之间)③ 目的基因是否翻译出蛋白质——抗原—抗体杂交方法个体水平检测——抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的活性比较，以确定功能是否相同等10.蛋白质工程通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求，是延伸出来的第二代基因工程。11.限制酶能识别特定的 DNA 序列，并在特定位点上切割 DNA，形成黏性末端或平末端12.启动子为 DNA 序列，其具有 RNA 聚合酶结合位点，能启动转录，合成 RNA13.用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时，首先将目的基因导入农杆菌 Ti 质粒的 T－D...
