丁基苯酞对小鼠闭合性脑外伤后脑组织的保护作用种兆忠1冯亦璞(中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所,北京100050)摘要研究了丁基苯酞(NBP)对小鼠闭合性脑外伤24h后脑损伤的保护作用.结果表明,脑外伤后24h小鼠记忆功能下降,脑水肿形成,血脑屏障通透性增加.脑外伤后5和60minipNBP12.5-50mg·kg21可明显改善小鼠的记忆功能;减轻脑水肿程度;降低血脑屏障的通透性.NBP(50mg·kg21)还可提高小鼠脑外伤后脑组织中胆碱乙酰基转移酶的活性.提示NBP对脑外伤后脑组织有一定的保护作用.关键词丁基苯酞;脑损伤;学习;记忆;脑水肿;血脑屏障;胆碱乙酰基转移酶中国图书资料分类法分类号R972丁基苯酞(dl232n2butylphthalide,NBP)是本所研制开发的�类新药.本研究组以前的工作表明,NBP具有良好的抗脑缺血作用.脑外伤后,由于脑微血管系统的机械损伤和蛛网膜下腔出血的形成而导致继发性脑缺血[1,2].NBP显示的对脑缺血和蛛网膜下腔出血的治疗作用[3],提示NBP对外伤性脑损伤可能有一定的减轻作用.本文通过对小鼠闭合性脑外伤后记忆功能的研究,探讨该药对脑外伤后学习记忆的保护作用及其机理.脑水肿为脑外伤的严重并发症,并且是脑外伤后死亡的重要原因.因此,本文亦观察了小鼠闭合性脑外伤后脑含水量及血脑屏障通透性的变化和NBP的作用.1材料和方法1.1动物和药品昆明种小鼠,♂,体重28-34g,中国医学科学院动物繁育中心提供.分笼饲养,每笼10只,实验前自由进水进食.NBP,纯度为97.01%,本所药物化学合成室提供,用时以Tween80配成乳剂.1.2闭合性脑外伤模型参照文献方法制作小鼠闭合性脑外伤模型[4].握持小鼠颈背部皮肤将其固定于损伤装置的底部平1998207214收稿1999201222接受1现在北京中医药大学中药学院药理学教研室,北京100029台上并使其下颌紧贴于平台的边缘.竖立的金属杆上套一可以在杆上自由滑动的50g砝码.用橡皮泥将一锥形撞击锤固定于杆的底端,撞击锤的尖端直径为2.5mm.将撞击锤头端顶在小鼠的颅骨上,位置约在矢状平面右侧2-4mm处.将砝码自18cm高处放开,使其自由落下,通过撞击金属锤,造成闭合性脑外伤,剔除死亡小鼠,死亡率(包括即刻和外伤后24h内死亡数)为13%-27%.小鼠分为5组:假手术组,小鼠抓持过程同上,但不放下砝码;损伤对照组,于损伤后5和60min各ip10mL·kg210.5%Tween80;NBP12.5,25和50mg·kg21组,药物注射容量和时间同溶剂对照组.脑外伤后24h进行一系列实验.1.3记忆障碍实验跳台实验装置包括一个21cm×21cm×50cm的暗箱,置于内设有可通电的铜栅的底座上.在铜栅的中央有一固定未通电的平台(4cm×4cm×4cm).实验时将小鼠放于平台上,记录下台潜伏期,然后将小鼠置于箱角位置的铜栅上,通电(38V,50Hz),记录上台潜伏期和3min内上台小鼠数.然后进行脑外伤制作.24h后再次进行跳台实验,记录小鼠上台潜伏期(超过3min者以180s计)和上台小鼠数.1.4脑组织含水量的测定脑外伤后24h,断头处死小鼠,迅速取出脑组织.自损伤侧(右侧)皮层取约50mg,称湿重.将湿组织于烤箱中100℃烘烤24h,称干重.脑含水量以下式计算:脑含水量(%)=(湿重-干重)�湿重×100%.1.5血脑屏障通透性的测定参考Uyama等[5]的方法并略作修改.闭合性脑外伤后23h,自尾静脉注入0.1mL25mg·kg21的伊文氏蓝.1h后,用0.4%的水合氯醛麻醉(400mg·kg21),打开胸腔,剪开右心耳,自左心室灌注10mL生理盐水以冲净脑微血管内的染料.取出脑组织,称取右半球重量.将脑组织于1.5mL50%的三氯醋酸中匀浆(电动匀浆器,PT10-35,瑞士).5000×g,离心20min,取上清1mL,用无水乙醇稀—491—ChineseJournalofPharmacologyandToxicology1999Aug;13(3):194-196释3倍.荧光分光光度法测定上清中染料的含量(HitachiMPF24荧光分光光度计),发射波长(Κex)=620nm,激发波长(Κem)=680nm,狭缝为18.1.6胆碱乙酰基转移酶活性测定闭合性脑外伤后24h,断头处死小鼠,迅速取出脑组织,置于冰上,自损伤侧皮层部位取约50mg脑组织,称重后,置于10mmol·L21Tris2HCl缓冲液(pH7.4)1mL中匀浆,加10mmol·L21EDTA�0.5%Triton2X100(1∶1)液1mL.取40ΛL匀浆液,参照文献[6]以分光光度法进行胆碱乙酰基转移酶活性测定.记录吸光度值(A324nm).以体系中辅酶A的生成量作为胆碱乙酰基转移酶活性的标准.1.7统计学处理外...
