专题14现代生物科技专题一、基因工程和蛋白质工程1
掌握基因工程的3种工具:(1)限制性核酸内切酶:识别特定核苷酸序列,并在特定位点切割DNA分子,切开磷酸二酯键,产生黏性末端或平末端
(2)DNA连接酶:连接两个DNA片段形成磷酸二酯键
(3)载体:有质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等
掌握基因工程的操作流程:(1)获取目的基因的3种途径:①从基因文库中获取
②利用PCR技术扩增
③通过化学方法人工合成
(2)基因表达载体的构建:①目的基因
②启动子:RNA聚合酶识别和结合部位,驱动基因转录
③终止子:RNA聚合酶脱离部位,终止转录
④标记基因:鉴别受体细胞中是否导入含有目的基因的基因表达载体
(3)将目的基因导入受体细胞:导入方法根据生物的种类不同而不同:①植物:农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法
②动物:显微注射技术(导入受精卵)
③微生物:感受态细胞法(Ca2+处理)
(4)目的基因的检测与鉴定:①检测目的基因是否导入受体细胞:DNA分子杂交技术
②检测目的基因是否转录出mRNA:分子杂交技术
③检测目的基因是否翻译成蛋白质:抗原-抗体杂交技术
④个体生物学水平鉴定:根据表达性状判断
PCR技术:(1)原理:DNA双链复制
(2)条件:引物、DNA模板、TaqDNA聚合酶、四种脱氧核苷酸
(3)过程:变性→复性→延伸
(4)结果:目的基因呈指数形式扩增(约为2n,n为扩增循环次数)
(5)与体内DNA复制不同:不需要解旋酶,需耐高温的DNA聚合酶
蛋白质工程:(1)原理:中心法则的逆推
(2)实质:改造基因
(3)产物:产生自然界中没有的新蛋白质
二、细胞工程1
植物组织培养:(1)条件:离体,一定营养物质,激素(生长素、细胞分裂素)等
(2)培养基状态:固体培养基
(3)植物组织培养的目的不同,培养阶段也就不一样:①若生产人工种子,则培养到胚状体阶